လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ထၢတ်ႈထႅင်ႈႁႅင်းၼိူဝ်ႉ တီႈၼႂ်းသဵၼ်ႈတၢင်း secretory ၼႆႉ မၼ်းလမ်ႇလွင်ႈတႃႇ ထိင်းသိမ်း လွင်ႈတွမ်ႇတွမ်ႊၶဝ် ၸႅၵ်ႇၽႄဝႆႉ လႄႈ လွင်ႈယူႇသဝ်း တီႈတူဝ်ၶိင်းၶဝ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လိူဝ်သေ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ၵွၼ်ႈမၼ်းယဝ်ႉ ပုၼ်ႈၽွၼ်း ယႂ်းၼိူဝ်ႉ ၼႂ်းၵၢၼ် ၸႅၵ်ႇၽႄ kinesin ၼႂ်းပိူင်ၵၢၼ် တေႃႉသူင်ႇ secretory ၼႆႉ ပဵၼ်ၶေႃႈထၢမ် ပိုၼ်ႉထၢၼ်ႈ ဢၼ်ယၢမ်ႈမီးမႃး ၶၢဝ်းႁိုင် ဢၼ်ပႆႇလႆႈ ၶေႃႈတွပ်ႇမၼ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈၼႆႈၼႆႉ ႁဝ်းၶႃႈႁဵတ်းလွင်ႈထႆႇႁၢင်ႈ 3D ဢၼ်မီးသီလၢႆသီ ဢၼ်မီးလွင်ႈၶႅမ်ႉလႅပ်ႈလီ မိူဝ်ႈလဵဝ်ၵၼ် တႃႇၼႄလၵ်းထၢၼ် ၼႂ်းတူဝ်မီးၸႂ်ဝႃႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢမ်ႇၶၢႆႉလႆႈ glycosylphosphatidylinositol ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇ ဢၼ်မီး ပွတ်းတွၼ်ႈယႂ်း ceramide ဢၼ်ယၢဝ်းႁႅင်းၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇႁူမ်ႈၵၼ်သေ ၸႅၵ်ႇဢွၵ်ႇပဵၼ် endoplasms ဢၼ်ၶိုၵ်ႉတွၼ်း လူၺ်ႈ ၼႃႈတီႈဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ပႅၵ်ႇပိူင်ႈၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လိူဝ်သေၼၼ်ႉ ႁဝ်းၼႄဝႃႈ တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်းသၢႆ ၶွင် သႄႇရႃႇမၢႆႉ ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ဢႅၼ်ႇတူဝ်ႇပလႅတ်ႉသမ်ႇ ရီႇတီႇၵူဝ်ႇလမ်ႇၼႆႉ ပဵၼ်လွင်ႈယႂ်ႇ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈလိူၵ်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်ၼႆႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈလဵပ်ႈႁဵၼ်းႁဝ်းၼႆႉ ပၼ်လၵ်းထၢၼ်ၵမ်းသိုဝ်ႈ ၼႂ်းတူဝ်မီးၸႂ် ဢွၼ်တၢင်းသုတ်း တႃႇၸႅၵ်ႇၽႄ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် တၢင်းယၢဝ်း ၶူၼ်းထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ႁႂ်ႈပဵၼ် ဢွင်ႈတီႈ ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉ တႃႇသူင်ႇဢွၵ်ႇ ၼႂ်းသဵၼ်ႈတၢင်း secretory ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
တီႈၼ်ႂးသႄး(လ်) eukaryotic ၼၼ်ႉ၊ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႃးၼ်ႂး endoplasmic reticulum(ER) ၼၼ်ႉလႆႈထုၵ်ႇၸႅၵ်ႇဢွၵ်ႇမိူဝ်ႈၽွင်းတေႃႉသူင်ႇလတ်းၽၢၼ်ႇသဵၼ်ႈတၢင်းဢၼ်ထိင်းသိမ်းတွၼ်ႈတႃႇတေသူင်ႇၸူးတီႈယိူင်းမၢႆသႄး(လ်)ဢၼ်သၢင်ႇထုၵ်ႇၶွင်ၶဝ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (1) လိူဝ်သေၼၼ်ႉ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်ပဵၼ်ၵၢင်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ မၼ်းလႆႈလၢမ်းၶၢတ်ႈမႃး ၶၢဝ်းႁိုင်ဝႃႈ ယႂ်းၼိူဝ်ႉမၢင်ႊၸိူဝ်းၼႆႉ ၸၢင်ႊႁဵတ်းပဵၼ် တီႈဢွၵ်ႇဢၼ်လႆႈလိူၵ်ႈဝႆႉ လူၺ်ႈ ဢဝ်ၶဝ် ႁဵတ်းပဵၼ် ၸုမ်းၽီႉ ဢၼ်ပဵၼ် ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ (2-5) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၵူၺ်းၵႃႊ မၼ်းတိုၵ်ႉပႆႇမီး လၵ်းထၢၼ် ၵမ်းသိုဝ်ႈ ၼႂ်းတူဝ်မီးၸႂ် တႃႇၼႄလၵ်းထၢၼ် လွင်ႈၶွတ်ႇၽွတ်ႈ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ ဢၼ်ၸၢင်ႊပဵၼ်လႆႈၼႆႉ။ တႃႇတေၵႄႈလိတ်ႈပၼ်ႁႃ ပိုၼ်ႉထၢၼ်ၼႆႉ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈလဵပ်ႈႁဵၼ်း ၼႂ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉဝႃႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ၵမ်ႉယၼ်ဝႆႉ ၵလၢႆႇၵူဝ်ႇသိၼ်ႇၾူတ်ႉၾႅတ်ႉတီႇလီႇၼူဝ်ႇသိတ်ႉ (GPI) (GPI-APs) ၼၼ်ႉ လုၵ်ႉတီႈ ER သေ သူင်ႇဢွၵ်ႇ ပိူင်ႈၵၼ်ၸိူင်ႉႁိုဝ်ၼႆၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ GPI-APs ၼႆႉ ပဵၼ် ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်မီးတီႈ ၽိဝ်ၼႃႈ သႄးလ် ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ၼမ်ႉၼၵ်း လၢႆလၢႆမဵဝ်း ( 6, 7 ) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ GPI-AP ၼႆႉ ပဵၼ် ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃး တီႈ ၽိုၼ်လိၵ်ႈ ၽၢႆႇၼွၵ်ႈ ၽိဝ်ၼင် ပလႅတ်ႉသမ်ႇ ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၵလၢႆႇၵူဝ်ႇလိပ်ႉပိတ်ႉ (GPI anchor) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶဝ်ႁပ်ႉၶၢမ်ႇ GPI anchors မိူၼ်ၼင်ႇ လွင်ႈမူၼ်ႉမႄးဝၢႆးလင် လွင်ႈပိၼ်ႇၽႃႇသႃႇ ဢၼ်ၵဝ်ႇၵႄႇ ၼႂ်း ER lumen (8) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ၸပ်းၵၼ်ယဝ်ႉ GPI-AP ၼႆႉ မၼ်းလတ်းၽၢၼ်ႇ ၶိူင်ႈ Golgi (5, 9) ဢၼ်လုၵ်ႉတီႈ ER သေ ၵႂႃႇၸူး ၽိဝ်ၼင် plasma ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈမီး GPI anchors ၼႆႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ GPI-AP လႆႈတေႃႉသူင်ႇ ႁင်းၶေႃ တီႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃး တီႈၽိဝ်ၼင် (ပႃးၸဵမ် ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ၽိဝ်ၼင် plasma တၢင်ႇၸိူဝ်း) ၸွမ်းသဵၼ်ႈတၢင်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃး (5, 9, 10) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈၼႂ်းသႄးလ် မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉ GPI-APs ၼႆႉ လႆႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃး တီႈၼႂ်း endoplasmic reticulum ၼၼ်ႉသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် လွတ်ႇလိူတ်ႈ ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ ႁူမ်ႇဝႆႉ လူၺ်ႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်သုၵ်ႉသၢၵ်ႉ II (COPII) (6, 7) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈတႅပ်းတတ်း လၢႆးၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်ၼႆႉ ၼႂ်းလၢႆးသူင်ႇဢွၵ်ႇ ER ၼႆႉ ဢမ်ႇၸႅင်ႈလႅင်းလီ၊ ၵူၺ်းၵႃႊ မၼ်းထၢင်ႇဝႃႈ လၢႆးႁဵတ်းသၢင်ႈၼႆႉ တေၸၢင်ႊလူဝ်ႇ ထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ဢၼ်ပဵၼ် လွင်ႈမႄးၵေႃႇသၢင်ႈ တွၼ်ႈထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ၶွင် GPI anchor (5, 8) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉ ဝၢႆးသေ GPI ၸပ်းၵၼ်ယဝ်ႉ လွင်ႈၶိုၼ်းမႄးၶူၼ်းထၢတ်ႈ GPI ၼၼ်ႉ တႄႇပဵၼ်မႃးၵမ်းလဵဝ်သေ ၼႂ်းလွင်ႈတၢင်းတင်းၼမ်ၼၼ်ႉ မၼ်းႁဵတ်းႁႂ်ႈ သႄႇရႃႇမၢႆႉ ၸပ်းၸွမ်း ဢႅတ်ႉသိတ်ႉထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ဢၼ်မီးသၢႆယၢဝ်း 26-carbon (C26:0) (11, 12) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ C26 ceramide ၼႆႉ ပဵၼ်ပိူင်လူင် ဢၼ်သႄးလ် မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႃး တေႃႇထိုင်ယၢမ်းလဵဝ်။ မၼ်းႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ၼႂ်း ER သေ ၵမ်ႈၼမ် မၼ်းလႆႈသူင်ႇဢွၵ်ႇၵႂႃႇ ၼႂ်းၶိူင်ႈ Golgi လူၺ်ႈ လွတ်ႇလိူတ်ႈ COPII (13) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ER ဢၼ်သူင်ႇဢွၵ်ႇ GPI-AP ၼႆႉ မၼ်းလူဝ်ႇ ၵၢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ သႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်သိုပ်ႇႁဵတ်းယူႇ (14, 15) လႄႈ ၶိုၼ်းပဵၼ်မႃး လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊ သႄႇရႃႇမၢႆႉ ႁႂ်ႈပဵၼ် inositol phosphate သႄႇရႃႇမၢႆႉ (IPC) ၼႂ်းၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ Golgi ၼၼ်ႉ မၼ်းဢိင်ၼိူဝ် ၵၢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ GPI (16) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈလဵပ်ႈႁဵၼ်း ပၢႆးတူဝ်ၸႂ် ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၽီႉပွမ်ၼၼ်ႉ ၼေဝႆႉဝႃႈ acyl chain ceramides ဢၼ်ယၢဝ်းႁႅင်းၼၼ်ႉ ၸၢင်ႊႁူမ်ႈၵၼ်သေ ပဵၼ်မႃး ၼႃႈလိၼ် ဢၼ်ၶပ်ႉဝႆႉ ဢၼ်မီး ၼမ်ႉၵတ်ႉ ပၢႆးတူဝ် ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ပိူၼ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (17, 18) ၶေႃႈမုၼ်းၸိူဝ်းၼႆႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈမီးမႃး ၶေႃႈထၢင်ႇထိူမ်ဝႃႈ C26 ceramide လႄႈ GPI-AP ဢၼ်ပႃး C26 ceramide ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၼမ်ႉၵတ်ႉပၢႆးတူဝ်ၶဝ် တႃႇႁူမ်ႈႁွမ်းၵၼ် ႁႂ်ႈပဵၼ် ပိုၼ်ႉတီႈ ဢၼ်ၶပ်ႉၶိုင်ဝႆႉ ဢမ်ႇၼၼ် ပိုၼ်ႉတီႈ ဢၼ်မီး သိင်ႇဝႅတ်ႉလွမ်ႉ ER ၽီႉယၢင် ဢၼ်ဢမ်ႇၼိမ်သဝ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပိူင်လူင်မၼ်း မၼ်းပဵၼ် ၵလီႇသႄႇရူဝ်ႇလီႇပိတ်ႉ ဢၼ်ပွတ်းလႄႈ ဢၼ်ဢမ်ႇတဵမ်ထူၼ်ႈ (C16:1 လႄႈ C18:1) (19, 20) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပိုၼ်ႉတီႈၸိူဝ်းၼႆႉ တေလိူၵ်ႈဢဝ် လွင်ႈပၵ်းၸႂ်ၼိူဝ် ဢွင်ႈတီႈဢွၵ်ႇ ER ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈ (ERES) တီႈဢၼ် သႄႇရႃႇမၢႆႉ လႄႈ သႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် GPI-AP ၼၼ်ႉ တေၸၢင်ႊႁူမ်ႈၵၼ် တေႃႉသူင်ႇၵႂႃႇ တီႈ Golgi ၼႂ်း COPII vesicle ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ် (5) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၼႂ်းၵၢၼ်လဵပ်ႈႁဵၼ်းဢၼ်ၼႆႉ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈထတ်းတူၺ်း လွၵ်းလၢႆးဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် ယၢင်ယႂ်းၼႆႉ ၵမ်းသိုဝ်ႈ လူၺ်ႈၸႂ်ႉတိုဝ်း မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်ႁၼ်လႆႈ ၶၢဝ်းယၢမ်းတႄႉတႄႉ (SCLIM) ဢၼ်ပဵၼ် လွၵ်းလၢႆးမၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်ၶိုတ်းၵၢပ်ႈ ဢၼ်ၸၢင်ႈပႂ်ႉတူၺ်းလႆႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်မီးပၢႆႉသၢႆလႅင်း မိူဝ်ႈလဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (21၊ 22)။
ဢွၼ်တၢင်းသုတ်း ႁဝ်းၶႃႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ပၢႆးၸၢင်ႊ SCLIM သေ မၵ်းမၼ်ႈဝႃႈ GPI-AP ဢၼ်ၽဵၼ်ႈၽဵၼ်ႈ ဢၼ်ပႃးၸုမ်း C26 ceramide ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇထတ်းတူၺ်း တီႈထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ၽိဝ်ၼင် ဝၢႆးသေ ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ER တီႈၼႂ်း S. cerevisiae ၼၼ်ႉၸိူင်ႉႁိုဝ်ၼႆၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တႃႇတေထတ်းတူၺ်း လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ER ၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ပိူင်ၸိူဝ်ႉၽၼ်း ဢၼ်ၸၢင်ႊႁၼ်လႆႈ ၵမ်းသိုဝ်ႈ ၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇ ဢၼ်ၶဝ်ႈမႃး ၼႂ်း ERES ၼႂ်းတူဝ်မီးၸႂ် (7, 23) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼင်ႇၵုၼ်ႇသိၼ်ၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈလိူၵ်ႈဢဝ် GPI-AP Gas1 ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ဢၼ်မီး ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လႅင်းသီၶဵဝ် (GFP) လႄႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ၽိဝ်ၼင် Mid2 ဢၼ်မီး ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လႅင်းလႅင်း ဢၼ်ၸမ်တႂ်ႈသၢႆလႅင်းလႅင် (iRFP) ၼၼ်ႉသေ တင်းသွင်ဢၼ်ၼႆႉ ယိူင်းၸူး ၽီႉ plasma (24–26) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈၼႂ်း လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊသၼ်ႇထေႇ ဢၼ်ႁူႉထိုင်တၢင်းမႆႈ sec31-1 ၼၼ်ႉ၊ ၵုၼ်ႇသွင်ဢၼ်ၼႆႉ လႆႈထုၵ်ႇၼႄဝႆႉ ၽၢႆႇတႂ်ႈ ၽူႈပၼ်ႁႅင်း ဢၼ်ဢမ်ႇၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ ထၢတ်ႈ galactose ပဵၼ်မႃး လႄႈ ၶေႃႈမၢႆတွင်း ERES ဢၼ်ပဵၼ် တွၼ်ႈလမ်ႇလွင်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈတၢင်းမႆႈသုင်သုတ်း (37°C) ၼၼ်ႉ ယွၼ်ႉဝႃႈ လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႈသၼ်ႇထေႇ sec31-1 ၼႆႉ မၼ်းတုမ်ႉတိူဝ်ႉ လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ၶူဝ်းၶွင် COPII coat Sec31 တႃႇႁႄႉႁၢမ်ႈ လွင်ႈ COPII ဢွၵ်ႇငွင်ႉ လႄႈ လွင်ႈသူင်ႇဢွၵ်ႇ ER ၼၼ်ႉလႄႈ ၵုၼ်ႇဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇၼၼ်ႉ ၸုတုမ်ၵၼ်ဝႆႉ တီႈ ER (23) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ၵတ်းလူင်းထိုင် တၢင်းမႆႈတႅမ်ႇ (24°C) ယဝ်ႉၼၼ်ႉ သႄးလ် ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႊသၼ်ႇထေႇ sec31-1 ၼၼ်ႉ ၶိုၼ်းမႃးတီႈ ပိုၼ်ႉတီႈ ဢၼ်သိူင်ႇသိမ်းဝႆႉၼၼ်ႉသေ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ဢၼ်မႂ်ႇ ဢၼ်ႁွမ်ဝႆႉၼၼ်ႉ တႄႇသူင်ႇဢွၵ်ႇ တီႈ ER ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈႁၼ်ႁၢင်ႈ CLIM ၼၼ်ႉ ၼႄဝႃႈ Gas1-GFP လႄႈ Mid2-iRFP ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇမႂ်ႇၼၼ်ႉ ၵမ်ႈၼမ် တိုၵ်ႉႁွမ်ဝႆႉ ၼႂ်း ER ၶွင် သႄးလ် ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႈသၼ်ႇထေႇ sec31-1 ဝၢႆးသေ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 37°C ယဝ်ႉ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ 24°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 5 မိၼိတ်ႉ (ႁၢင်ႈ 1) ၼႆယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉဝႃႈ Mid2-iRFP ၼႆႉ မၼ်းၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼိူဝ်ၽိဝ်ၼင် ER တင်းမူတ်းသေ Gas1-GFP ၼႆႉ မၼ်းၶွၼ်ႈတုမ်ၵၼ်သေ ၵဵပ်းႁွမ်ဝႆႉ တီႈၼႂ်းပိုၼ်ႉတီႈ ၽိဝ်ၼင် ER ဢၼ်ဢမ်ႇသိုပ်ႇၵၼ်ၼၼ်ႉလႄႈ လွင်ႈၽႄႈၸွတ်ႇၶဝ်ၼၼ်ႉ ပိူင်ႈၵၼ်တင်းမူတ်း (ႁၢင်ႈ 1, A တေႃႇထိုင် C လႄႈ Movie S1)။ လိူဝ်ၼၼ်ႉ မိူၼ်ၼင်ႇ ႁၢင်ႈ 1D ၼၼ်ႉ ၸုမ်းၵႅတ်ႉသ်1-GFP ၼႆႉ ဢမ်ႇမီး Mid2-iRFP ။ ၶေႃႈတွပ်ႇၸိူဝ်းၼႆႉ ၼေဝႆႉဝႃႈ GPI-AP လႄႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင်ၼၼ်ႉ လႆႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ ပဵၼ်တီႈ ၽီႉ ER ဢၼ်ပႅၵ်ႇပိူင်ႈၵၼ် မိူဝ်ႈၸဝ်ႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸုမ်း Gas1-GFP ၼႆႉ တိတ်းၸပ်းၵၼ်တင်း ERES ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈ ဢၼ်မီး ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း COPII ၶွင် mCherry Sec13 (ႁၢင်ႊ 1, E လႄႈ F လႄႈ ၸိူင်း S1) (23) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
သႄးလ် sec31-1 ၼႆႉ မၼ်းၼေပၼ် လွင်ႈထွၼ်ဢွၵ်ႇ ဢၼ်ပဵၼ်မႃးယွၼ်ႉ ၵႃႇလႅၵ်ႉတူဝ်ႇသ်၊ ၶိူဝ်းဢႅတ်ႉသိတ်ႉ ဢၼ်ယၢဝ်း (C26) သႄႇရႃႇမၢႆႉ GPI-AP ၵႅတ်ႉသ်1-GFP (GPI-AP, သီၶဵဝ်) လႄႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႊ ၽိဝ်ၼင် Mid2-iRFP (TMP, သီၶဵဝ်) လႄႈ ဢၼ်ၼႆႉ ပဵၼ် ERES ဢၼ်ၵေႃႇသၢင်ႈ လွင်ႈတၢင်ႇၸိုဝ်ႈ Sec13-mESC, Cherry ၼႂ်း မိၼိတ်ႉ ၶၢႆႉၵႂႃႇတီႈ 24°C သေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ 5 မိၼိတ်ႉ ဢဝ် SCLIM ထႆႇၶႅပ်းႁၢင်ႈ။ (A တေႃႇထိုင် C) ၼေဝႆႉ ႁၢင်ႈၽၢင် 2D ဢၼ်ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉ ဢမ်ႇၼၼ် ဢၼ်လဵဝ် ၶွင်ၼႃႈၽဵင်ႇပဵင်း (A) ႁၢင်ႈၽၢင် 2D ဢၼ်လၢမ်းၶၢတ်ႈဝႆႉ 10 z-sections (B) ဢမ်ႇၼၼ် ႁၢင်ႈၽၢင် 3D cell hemisphere ၶွင်ၵုၼ်ႇသိၼ် လႄႈ ၶေႃႈမၢႆ ERES (C)။ သၵႄး 1μm (A လႄႈ B)။ တၢင်းယႂ်ႇမၼ်း ပဵၼ် 0.551μm (C) ။ Gas1-GFP ၼႆႉ လႆႈႁၼ်တီႈ ၼႃႈလိၼ် ER ဢမ်ႇၼၼ် ၸုမ်းဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉသေ Mid2-iRFP သမ်ႉလႆႈႁၼ် လႄႈ ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼႂ်းၽီႉ ER (C) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (D) ႁၢင်ႈၽၢင် ဢၼ်ၼႄဝႆႉ လွင်ႈႁႅင်းလႅင်း ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ် တင်း Gas1-GFP လႄႈ Mid2-iRFP ၼႂ်းၸုမ်း Gas1-GFP ၸွမ်းသၢႆၵၢင်ႇသီၶဵဝ် (ၽၢႆႇသၢႆႉ) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ AU ဢၼ်ပဵၼ် ယူးၼိတ်ႉ ဢၼ်ဢမ်ႇမီးလွင်ႈထၢင်ႇထိူမ်။ (E လႄႈ F) ၼႆႉ ပဵၼ်ၶႅပ်းႁၢင်ႈ 3D ဢၼ်ဢဝ်ၶူဝ်းၶွင် လႄႈ မၢႆ ERES ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸုမ်း Gas1-GFP ၸိူဝ်းၼႆႉ လႆႈႁၼ် ႁိမ်း ERES ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တၢင်းယႂ်ႇမၼ်း ပဵၼ် 0.551μm ။ (F) ၵၢင်ႇဢၼ်ပဵၼ်ၵွၼ်ႈသီၶဵဝ်ၼၼ်ႉ မၢႆဝႆႉ ၸုမ်း Gas1-GFP ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ERES ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၽႅၼ်ႇၵၢင်လႄႈ ၽၢႆႇၶႂႃ ၼႄဝႆႉ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ 3D ဢၼ်ယႂ်ႇမႃး ဢၼ်ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉသေ ၼႄဝႆႉ လွင်ႈပၼ်ႇႁွပ်ႈ ၶွင် ၵွင် Gas1-GFP ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ၼႂ်းၵႄႈ ၸုမ်း Gas1-GFP လႄႈ ERES ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉ ၼႄဝႃႈ Gas1-GFP ၼႆႉ ၸၢင်ႊၶဝ်ႈၵႂႃႇလႆႈ ၼႂ်း ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉသေ ဢၼ်ၼႆႉ ပိူင်ႈၵၼ်တင်း လွင်ႈလိူၵ်ႈဢၼ် Mid2-iRFP ၸႂ်ႉတိုဝ်း တႃႇဢွၵ်ႇ ER ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တႃႇတေၵႄႈလိတ်ႈလႆႈ လွင်ႈၼႆႉ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ ERES ratio တႃႇၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်လဵဝ် ဢမ်ႇၼၼ် သွင်ဢၼ်ၵွႆး (ႁၢင်ႈ 2, A တေႃႇထိုင် C)။ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈႁၼ်ဝႃႈ ERES ၵမ်ႈၼမ် (70%) ၼႆႉ ပႃးၵုၼ်ႇသိၼ် မဵဝ်းလဵဝ်ၵူၺ်း။ ၶႅပ်းႁၢင်ႈတႂ်ႈ ႁၢင်ႈ 2C ၼႆႉ ၼႄဝႆႉ တူဝ်ယၢင်ႇ ERES ဢၼ်မီး Gas1-GFP ၵူၺ်း (ႁၢင်ႈ 1) ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP ၵူၺ်း (ႁၢင်ႈ 2) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပေႃးမႃးၼိူင်းတူၺ်းၼႆ ERES မွၵ်ႈ 20% ၼႆႉ မၼ်းပႃးၵုၼ်ႇသွင်ဢၼ် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉ ၼႂ်းပိုၼ်ႉတီႈလဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လႆႈႁၼ်ဝႃႈ ERES ၵမ်ႈၽွင်ႈ (10%) ၼႆႉ ပႃးၵုၼ်ႇသွင်မဵဝ်းသေတႃႉ လႆႈယူႇႁင်းၶေႃ တီႈဢၼ်ပိူင်ႈၵၼ် ၸႅင်ႈလႅင်းလီၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉၼၼ် ၵၢၼ်ထတ်းသၢင် သဵၼ်ႈမၢႆ ဢၼ်ၼႆႉ ၼႄဝႃႈ ဝၢႆးသေ ER ၼၼ်ႉ သူင်ႇဢွၵ်ႇယဝ်ႉၼၼ်ႉ GPI-AP Gas1-GFP လႄႈ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင် Mid2-iRFP ၼၼ်ႉ ၸႅၵ်ႇပဵၼ် ERES ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ် (ႁၢင်ႈ 2D) ၼႆယဝ်ႉ။ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်မီးၼမ်ႉတွၼ်း ဢၼ်ၼႆႉ မၼ်းၵိုင်ႇငၢမ်ႇၵၼ် တင်း လွင်ႈထတ်းသၢင် ပၢႆးထၢတ်ႈသၢႆၸႂ် မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်း (6) လႄႈ လွင်ႈတႅပ်းတတ်း ပၢႆးႁၢင်ႊ (7) ၼၼ်ႉတႄႉတႄႉ။ ယဝ်ႉၵေႃႈ ႁဝ်းၶႃႈ ၸၢင်ႈတူၺ်းလႆႈ လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လႆႈၵုမ်းၶင်ဝႆႉ ဢၼ်ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES ၼၼ်ႉယူႇ (ႁၢင်ႈ 2E လႄႈ ၸိူင်း S2)။ ႁၢင်ႈ 2E ၼႆႉ ၼႄဝႆႉဝႃႈ ဢၼ်ပဵၼ် Gas1-GFP (ၽႅၼ်ႇ 3) ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP (ၽႅၼ်ႇ 4) ၼၼ်ႉ လုၵ်ႉတီႈၽၢႆႇလဵဝ်သေ ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES သေ လႆႈထုၵ်ႇႁႄႉႁၢမ်ႈဝႆႉ ၼႂ်းပိုၼ်ႉတီႈ ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉၵွႆး။ ၽႅၼ်ႇ 5 ၶွင် ႁၢင်ႈ 2E ၼၼ်ႉ ၼႄဝႆႉဝႃႈ Gas1-GFP လႄႈ Mid2-iRFP ၼႆႉ မၢင်ပွၵ်ႈ လႆႈႁၼ် ၼႂ်း ERES ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉသေတႃႉ ၶဝ်ၶဝ်ႈမႃး တီႈၽၢႆႇဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်သေ ၶွၼ်ႈတုမ်ၵၼ်ဝႆႉ တီႈၼႃႈလိၼ် ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ် ဢၼ်ၸၢင်ႊတၢင်တူဝ် လွတ်ႇလိူတ်ႈ COPII ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ႁဝ်းၶႃႈၵေႃႈ မၵ်းမၼ်ႈဝႃႈ လွင်ႈဢၼ်လႆႈပႂ်ႉတူၺ်း လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇလႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ၶွင် C26 ceramide ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် GPI-AP Gas1 ၼၼ်ႉ ပဵၼ် ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉ မၼ်းတႅတ်ႈၼႅတ်ႈ ယွၼ်ႉဝႃႈ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင်ထႅင်ႈဢၼ်ၼိုင်ႈ ဢၼ်ပဵၼ် ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ၽိဝ်ၼင် plasma ဢၼ်မီးပၢႆႉ GFP Axl2 (27 ) ၼၼ်ႉ ၼႄပၼ် လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်တင်း Mid2-iRFP ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (ၶႅပ်းႁၢင်ႈ S1 လႄႈ ၸိူင်း S3)။ Axl2-GFP ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇၼႆႉ မၼ်းၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ တီႈၽီႉ ER မိူၼ်ၼင်ႇ Mid2-iRFP (ႁၢင်ႊ S1, A လႄႈ B) သေ မၼ်းလႆႈယူႇၸွမ်း Mid2-iRFP တီႈၼႂ်း ERES ၵမ်ႈၼမ် (ႁၢင်ႊ S1, B တေႃႇထိုင် D) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၽႅၼ်ႇ 1 လႄႈ 2 ၶွင် ႁၢင်ႈ 1. S1C ၼႄဝႆႉ တူဝ်ယၢင်ႇ ERES သွင်ဢၼ် ဢၼ်ပဵၼ် ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင် သွင်ဢၼ် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းလွင်ႈၸိူဝ်းၼႆႉ ၶူဝ်းၶွင်တင်းသွင်ဢၼ် ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES ၸွမ်းၵၼ် (ႁၢင်ႈ S1E, ၽႅၼ်ႇ 3 လႄႈ ၸိူင်း S3)။
သႄးလ် sec31-1 ဢၼ်ၼႄပၼ် လွင်ႈထွၼ်ဢွၵ်ႇ ဢၼ်ဢမ်ႇၸၢင်ႈႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၵႃႇလႅၵ်ႇတူဝ်ႇ ဢွၵ်ႇမႃးၼၼ်ႉ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP (GPI-AP, သီၶဵဝ်) လႄႈ Mid2-iRFP (TMP, သီသွမ်ႇ) လႄႈ ERES ဢၼ်ၶဝ်ႈပႃးဝႆႉ ဢၼ်မီးၸိုဝ်ႈ Sec13-mCherry (ERES, သီၶဵဝ်) ၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ်ဝႆႉတီႈ 37 ဝၢႆးသေ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ °C တေႃႇထိုင် 30 မိၼိတ်ႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ block သေ ဢဝ်ၶႅပ်းႁၢင်ႈ လူၺ်ႈ SCLIM ဝၢႆးသေ 20 မိၼိတ်ႉ။ (A ထိုင် C) ႁၢင်ႈၽၢင်လၢမ်းၶၢတ်ႈ 2D ဢၼ်တၢင်တူဝ် (A; scale bar, 1μm) ဢမ်ႇၼၼ် ႁၢင်ႈၽၢင်ၶိုင်ႈလုမ်ႈၾႃႉ 3D cell (B လႄႈ C; scale unit, 0.456μm) ၶွင်ၵုၼ်ႇသိၼ်လႄႈ 10 တွၼ်ႈ z ဢၼ်မၢႆဝႆႉလူၺ်ႈ ERES။ ၽႅၼ်ႇတႂ်ႈ တီႈ (B) လႄႈ ၽႅၼ်ႇတီႈ (C) ၼၼ်ႉ ၼႄဝႆႉ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဢၼ်ႁဵတ်းၵၢၼ်ဝႆႉ တႃႇၼႄ ၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်မီးဝႆႉ ၼႂ်း ERES (သီၶဵဝ်) [Gas1-GFP (သီၶဵဝ်) လႄႈ Mid2-iRFP (သီၶဵဝ်လႅင်း)] ၼၼ်ႉၵွၺ်း။ (ၵ) ၵၢင်ႇပိုတ်ႇ - ERES ၼႆႉ တေႃႉသူင်ႇၵုၼ်ႇ ၼိုင်ႈဢၼ်ၵူၺ်း (1 တေႃႇထိုင် 4)။ ၵၢင်ႇသီၶဵဝ် - ERES ၼႆႉ ပႃးၵုၼ်ႇဢၼ်ၸႅၵ်ႇဝႆႉ (5) ။ ၵၢင်ႇၶဵဝ် ဢၼ်ၵႅၼ်ႇၶႅင် - ERES ဢၼ်ပႃးၵုၼ်ႇ ဢၼ်မီးဝႆႉၸွမ်းၵၼ်။ တႂ်ႈၼႆႉ ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉ ဢၼ်လဵဝ်ၼၼ်ႉ ပႃးဝႆႉ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP (1) ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP (2) ၵူၺ်း။ သၵႄးလ် 100 nm ။ (D) လွင်ႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဢၼ်ၼႄဝႆႉ ၼႂ်း (C) ၼၼ်ႉ။ ႁူဝ်ပၢၵ်ႇၽတ်ႉၽဵင်ႇ ERES ဢၼ်ပႃး ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လဵဝ်ၵွႆး (Gas1-GFP ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP) ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်ၸႅၵ်ႇၽႄဝႆႉ လႄႈ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉ။ ၼႂ်းလွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်းလွတ်ႈလႅဝ်းသၢမ်ဢၼ်ၼၼ်ႉ n=432 ၼႂ်း 54 သႄး။ ႁၢဝ်းၽိတ်း = SD ။ t test ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵူႈသွင်ႁွႆး။ *** ပီႇ = 0.0002 ။ (E) ၶႅပ်းႁၢင်ႈ 3D ၶွင် ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉ ၶွင်ၵုၼ်ႇဢၼ်လႆႈၵုမ်းၶင်ဝႆႉ ဢၼ်မီးမၢႆ (C) ။ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP (သီၶဵဝ်) (3) ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP (သီသွမ်ႇ) (4) ၼႆႉ လုၵ်ႉတီႈၽၢႆႇလဵဝ်သေ ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES (သီၶဵဝ်) သေ လႆႈထုၵ်ႇႁႄႉႁၢမ်ႈဝႆႉ တီႈဢွင်ႈတီႈဢွၼ်ႇ ၼႂ်း ERES ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ မၢင်ပွၵ်ႈမၢင်လႂ် ၵုၼ်ႇသိၼ်သွင်မဵဝ်းၼႆႉ လုၵ်ႉတီႈၽၢႆႇလဵဝ်ၵၼ်သေ ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES (5) ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ်သေ လႆႈထုၵ်ႇႁႄႉႁၢမ်ႈဝႆႉ တီႈဢၼ်မီးႁင်းၶေႃ ၼႂ်း ERES ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ သၵႄးလ် 100 nm ။
ဝၢႆးၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈထတ်းတူၺ်း တၢင်းႁၼ်ထိုင်ဢၼ်ဝႃႈ ၶိူဝ်း acyl chain ceramide (C26) ဢၼ်ယၢဝ်း ဢၼ်မီးၼႂ်း ၽီႉ ER ၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ လွင်ႈၽွတ်ႈၸုမ်း လႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ Gas1 ပဵၼ်မႃး ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တႃႇတေႁဵတ်းႁႂ်ႈမၼ်းယဝ်ႉတူဝ်ႈၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ၸိူဝ်ႉၽၼ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ GhLag1 ဢၼ်မူၼ်ႉမႄးဝႆႉၼၼ်ႉသေ ၼႂ်းၼၼ်ႉ ဢဝ် GhLag1 (ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်တင်း Lag1 ၶွင်ၵုၺ်) မႃးတႅၼ်းတီႈ ၸိူဝ်ႉၽၼ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ ဢၼ်မီး ၽိဝ်သႄးလ် ၸိူဝ်ႉၽၼ်း Ceramide ဢၼ်ပွတ်းလိူဝ် မဵဝ်းလိူင်းၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႈ 3A) (2)။ လွင်ႈထတ်းသၢင် ၶွင် Mass spectrometry (MS) ၼၼ်ႉ ၼႄဝႃႈ တီႈၸိူဝ်ႉၽၼ်း ဢၼ်ပဵၼ် မဵဝ်းလိူင်းၼၼ်ႉ 95% ၶွင် သႄႇရႃႇမၢႆႉ တင်းမူတ်းၼၼ်ႉ ပဵၼ် သႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်ယၢဝ်းၼႃႇ (C26) သေ တီႈ GhLag1 ၼၼ်ႉ 85% ၶွင် သႄႇရႃႇမၢႆႉၼၼ်ႉ ပဵၼ်သၢႆယၢဝ်းၼႃႇ (C18 လႄႈ C16) ၼႆယဝ်ႉ။ ), ၼႂ်းသႄႇရႃႇမၢႆႉၼၼ်ႉ မီး 2% ၵူၺ်း ဢၼ်ပဵၼ် သႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်မီးသၢႆယၢဝ်းၼႃႇ (C26) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပႅၵ်ႉသမ်ႉဝႃႈ C18 လႄႈ C16 ceramides ၼႆႉ ပဵၼ် ceramides ပိူင်လူင် ဢၼ်လႆႈႁၼ် ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် GhLag1 တေႃႇထိုင်ယၢမ်းလဵဝ်သေတႃႉ လွင်ႈထတ်းသၢင် MS ၵေႃႈ မၵ်းမၼ်ႈဝႃႈ ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် GPI ၶွင် Gas1-GFP ဢၼ်ၼႄဝႆႉ ၼႂ်းၸိူဝ်ႉၽၼ်း GhLag1 ၼၼ်ႉ ပႃး C26 ceramides ဢၼ်တႅၵ်ႈၼိူင်းလႆႈတင်း ထၢတ်ႈယႂ်း ဢၼ်ပဵၼ် မဵဝ်းလိူင်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼမ်ႉၵတ်ႉမၼ်းၵေႃႈ မိူၼ်ၵၼ် (ႁၢင်ႈ 3A) (26)။ ယွၼ်ႉၼၼ် ဢၼ်ၼႆႉ ပွင်ႇဝႃႈ ဢႅၼ်ႇၸႆးမ် ဢၼ်ႁဵတ်းႁႂ်ႈ သႄႇရႃႇမၢႆႉ ၶိုၼ်းလီၶိုၼ်း Cwh43 ၼႆႉ မၼ်းလိူၵ်ႈလႆႈ တႃႇသႄႇရႃႇမၢႆႉ C26 ၼၼ်ႉ ၼမ်ၼႃႇ မိူၼ်ၼင်ႇ ႁၢင်ႈ 26 ၼၼ်ႉ မၼ်းလိူၵ်ႈဢဝ် ၶိူင်ႈယိပ်း GPI ဢၼ်လုၵ်ႉတီႈ သႄႇရႃႇမၢႆႉ C26 ဢိတ်းဢွတ်း ဢၼ်မီးၼႂ်း ၸိူဝ်ႉၽၼ်း GhLag1 ၼၼ်ႉ မႃးႁူမ်ႈၵၼ်။ S2 (29)။ ၸိူင်ႉႁိုဝ်ၵေႃႈလီ ၽိဝ်ၼင်သႄးလ် GhLag1 ၼႆႉ ပိူင်လူင်မၼ်း မၼ်းမီး C18-C16 သႄႇရႃႇမၢႆႉၵူၺ်းသေ Gas1-GFP သမ်ႉ တိုၵ်ႉမီး C26 သႄႇရႃႇမၢႆႉယူႇ။ လွင်ႈၼႆႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈၸိူဝ်ႉၽၼ်းဢၼ်ၼႆႉ ပဵၼ်ၶိူင်ႈမိုဝ်းဢၼ်လီသုတ်း တႃႇၵႄႈလိတ်ႈပၼ်ႁႃ တၢင်းယၢဝ်းသဵၼ်ႈသၢႆ acyl ၶွင် ၽီႉ ceramide ၼႂ်း ER ၼၼ်ႉ တႅတ်ႈတႅတ်ႈတေႃးတေႃးယဝ်ႉ။ ပုၼ်ႈၽွၼ်း ဢၼ်ထၢင်ႇထိူမ်ဝႆႉ ၶွင်ၸၼ်ႉထၢၼ်ႈ လႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢွၼ်တၢင်းသုတ်း ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈလဵပ်ႈႁဵၼ်း ၼမ်ႉၵတ်ႉ C26 Gas1-GFP ဢၼ်တေ ၸုတုမ်ၵၼ် ၼႂ်းၵွင် ၼႂ်း GhLag1 ဢၼ်မီး allele ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႈ ဢၼ်ႁူႉလႆႈ လွင်ႈမႆႈ ၶွင် sec31-1 ၼၼ်ႉ လူၺ်ႈ မၢၼ်ႇတူၺ်း ဢၼ်လႅင်း ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၽိင်ႈထုင်းၼၼ်ႉသေ တီႈၼၼ်ႉ မီးဝႆႉ သၢႆယၢဝ်း (C18-C16) ၼၼ်ႉၵွၺ်း ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER Ceramide (ႁၢင်ႈ 3) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈႁၼ်ဝႃႈ ၼႂ်း sec31-1 ၼၼ်ႉ Gas1-GFP ၵမ်ႈၼမ် မၼ်းၶွၼ်ႈတုမ်ၵၼ်ဝႆႉ ပဵၼ်ၵွင်သေ ၼႂ်း sec31-1 GhLag1 ဢၼ်မီး ၽိဝ်ၼင် ER ဢၼ်ယၢဝ်း (C18-C16) ၼၼ်ႉ ပိူင်လူင်မၼ်း ဢမ်ႇလႆႈၶွၼ်ႈတုမ်ၵၼ်သေ ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER တင်းမူတ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တႃႇတေလၢတ်ႈတႅတ်ႈတႅတ်ႈတေႃးတေႃးၼၼ်ႉ ယွၼ်ႉဝႃႈ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ၼႆႉ မၼ်းၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ERES ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႈ 1) လႄႈ ႁဝ်းၶႃႈ ၸင်ႇထတ်းသၢင်တူၺ်းထႅင်ႈဝႃႈ လၢႆးႁဵတ်းလၢႆးသၢင်ႈဢၼ်ၼႆႉ ၸွင်ႇမၼ်းတေပႃးၸွမ်း လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ ပရူဝ်ႇတိၼ်း ER ဢၼ်သူင်ႇဢွၵ်ႇၼၼ်ႉယူႇႁိုဝ်ၼႆယဝ်ႉ။ GPI-AP ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းပိူင် COPII ဢၼ်ၶိုၵ်ႉတွၼ်း တႃႇ ER သူင်ႇဢွၵ်ႇ ဢၼ်လႆႈထုၵ်ႇ Ted1′s ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၶိုၼ်းမႄးၵေႃႇသၢင်ႈ တွၼ်ႈ glycan ၶွင် ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် GPI ၼၼ်ႉ ၵုမ်းထိင်းဝႆႉ ႁၢဝ်ႈႁႅင်း (30, 31) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝႆးၼၼ်ႉ လွင်ႈၶိုၼ်းမႄးႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉ GPI-glycan ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇ ၶူၼ်းလေႃး p24 ဢၼ်ႁပ်ႉဢဝ် ၵုၼ်ႇဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင်ၼၼ်ႉ ႁပ်ႉၶၢမ်ႇဝႆႉ၊ ဢၼ်ၶိုၼ်းလိူၵ်ႈဢဝ် Lst1 ဢၼ်ပဵၼ် isoform ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၶွင် COPII ၵုၼ်ႇဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇဢၼ်လမ်ႇလွင်ႈ Sec24 ၊ ဢၼ်ပဵၼ်မႃး COPII Vesicles ဢၼ်မၢၵ်ႈမီး GPI-AP-33 ၼၼ်ႉ လူဝ်ႇၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉၼၼ် ႁဝ်းၶႃႈၸင်ႇလႆႈႁဵတ်းဢွၵ်ႇ လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊသၼ်ႇထေႇသွင်ဢၼ် ဢၼ်ဢဝ်လွင်ႈယႃႉပႅတ်ႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်းဢၼ်လဵဝ်ၸိူဝ်းၼႆႉ (ၶူဝ်းၶွင် p24 ဢၼ်သုၵ်ႉသၢၵ်ႉ Emp24 ၊ ဢႅၼ်ႇၸႆးမ် ဢၼ်မႄးႁဵတ်းၶိုၼ်း GPI-glycan Ted1 လႄႈ COPII subunit ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈ Lst1) မႃးႁူမ်ႈၵၼ်တင်း ၸိူဝ်ႉၽၼ်းဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႊသၼ်ႇထေႇ sec31-1 ၼၼ်ႉသေ လဵပ်ႈႁဵၼ်းတူၺ်းၶဝ် ၸွင်ႇမၼ်းပဵၼ်လႆႈ တႃႇတေပဵၼ်မႃး ၵႅတ်ႉသ်သတႃႇ GFP1-clu3 ၼၼ်ႉယူႇႁိုဝ်။ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈႁၼ်ဝႃႈ တီႈၼႂ်း sec31-1emp24Δ လႄႈ sec31-1ted1Δ ၼၼ်ႉ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ၼႆႉ ပိူင်လူင်မၼ်း ဢမ်ႇလႆႈႁူမ်ႈၵၼ်သေ ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER တင်းမူတ်း မိူၼ်ၼင်ႇ မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်း လႆႈႁၼ် တီႈၼႂ်း sec31-1 GhLag1 ၼၼ်ႉသေ တီႈၼႂ်း sec31-1lst1Δ ၼၼ်ႉ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP မိူၼ်ၼင်ႇ sec3 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶေႃႈတွပ်ႇၸိူဝ်းၼႆႉ ၼႄဝႃႈ လိူဝ်သေ မီး C26 ceramide ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER ၼၼ်ႉယဝ်ႉ လွင်ႈဢၼ် Gas1-GFP ႁူမ်ႈၵၼ်ၼၼ်ႉၵေႃႈ လူဝ်ႇလႆႈ ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း p24 complex သေ ဢမ်ႇလူဝ်ႇ လွင်ႈၵဵပ်းႁွမ် Lst1 ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈၶူၼ်ႉႁႃ လွင်ႈပဵၼ်လႆႈ ဢၼ်ဝႃႈ တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်း ceramide ၼႂ်းၽီႉ ER ၼႆႉ ၸၢင်ႊၵုမ်းထိင်းလႆႈ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ Gas1-GFP တင်း p24 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၵူၺ်းၵႃႈ ႁဝ်းၶႃႈလႆႈႁၼ်ဝႃႈ လွင်ႈဢၼ် C18-C16 သႄႇရႃႇမၢႆႉ မီးဝႆႉၼႂ်းၽိဝ်ၼင်ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇမီးလွင်ႈတုမ်ႉတိူဝ်ႉၼိူဝ် GPI-glycans ဢၼ် p24 complex ၶိုၼ်းႁဵတ်းၶိုၼ်း (ႁၢင်ႈ S3 လႄႈ S4, A လႄႈ B) ဢမ်ႇၼၼ် လွင်ႈဢၼ်မၼ်းၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း GPI-AP သေ သူင်ႇဢွၵ်ႇ GPI-AP ၼၼ်ႉ။ တၢင်းၵတ်ႉ. ၵဵပ်းႁွမ် COPII မဵဝ်းယွႆႈ Lst1 (ႁၢင်ႈ S4C)။ ယွၼ်ႉၼၼ် ၸုမ်းဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇလူဝ်ႇ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်မီး လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇတေႃႇ လွၵ်းလၢႆး ER ဢၼ်ပႅၵ်ႇပိူင်ႈၵၼ်ၼၼ်ႉသေတႃႉ မၼ်းၵမ်ႉထႅမ်ပၼ် လွၵ်းလၢႆး ၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်ၶိုင်ပွင်ၸွမ်း တၢင်းယၢဝ်း ယၢင်ယႂ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈ ထတ်းသၢင်တူၺ်းဝႃႈ တၢင်းယၢဝ်း သၢႆသဵၼ်ႈသၢႆ ceramide acyl ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER ၼၼ်ႉ လမ်ႇလွင်ႈတႃႇ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်မီးၽွၼ်းလီ ၶွင် Gas1-GFP ႁႂ်ႈပဵၼ် ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉႁိုဝ်ၼႆယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉဝႃႈ Gas1 ၼႂ်းၸိူဝ်ႉ GhLag1 ဢၼ်မီး ceramide ၶိူဝ်းပွတ်းၼၼ်ႉ ဢွၵ်ႇ ER သေ ၶဝ်ႈၵႂႃႇၼႂ်း ၽိဝ်ၼင် plasma (ႁၢင်ႈ S5) လႄႈ ႁဝ်းယုမ်ႇယမ်ဝႃႈ သင်ဝႃႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇ တၢင်းယၢဝ်း ceramide acyl chain ၼၼ်ႉ ႁေႃႈၵႂႃႇၼႆၸိုင် Gas1 ၼႂ်းၸိူဝ်ႉ GhLag1 ၼၼ်ႉ ၸၢင်ႈၶိုၼ်းၸီႉၼႄတၢင်းသေ ၶၢမ်ႈၵႂႃႇလႆႈယူႇ။ ၶူဝ်းၶွင် ERES ဢၼ်မီးၽိဝ်ၼင်မိူၼ်ၵၼ်။
(A) ၽိဝ်ၼင်သႄးလ် GhLag1 ၼႆႉ ပိူင်လူင်မၼ်း ပႃးဝႆႉ သႄးရႃႇမၢႆႉ C18-C16 ဢၼ်ပွတ်းလိူဝ်သေ ၽွင်းမိူဝ်ႈ ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် GPI ၶွင် Gas1-GFP ၼၼ်ႉ တိုၵ်ႉမီးဝႆႉ C26 IPC မိူၼ်ၵၼ်တင်း သႄးလ် မဵဝ်းလိူင်းၼၼ်ႉယူႇ။ ၽၢႆႇၼိူဝ်ၼႆႉ ပဵၼ်လွင်ႈထတ်းသၢင် တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်း acyl ၶွင် ceramide ၼႂ်းၽီႉသႄး ၶွင် မဵဝ်းလိူင်း (Wt) လႄႈ ၸိူဝ်ႉၽၼ်း GhLag1p လူၺ်ႈ လွင်ႈထတ်းသၢင် သၢႆလႅင်း (MS) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶေႃႈမုၼ်းၼႆႉ တၢင်တူဝ် ႁူဝ်ပၢၵ်ႇ ၶွင် သႄႇရႃႇမၢႆႉ တင်းမူတ်း။ ၽတ်ႉၽဵင်ႇ လွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်း ဢၼ်လွတ်ႈလႅဝ်း သၢမ်ဢၼ်။ ႁၢဝ်းၽိတ်း = SD ။ t test ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵူႈသွင်ႁွႆး။ **** ၽ <0.0001။ ၽႅၼ်ႇတႂ်ႈ - လွင်ႈထတ်းသၢင် MS ၶွင်တၢင်းယၢဝ်းသၢႆသဵၼ်ႈသၢႆ acyl ၶွင် IPC ဢၼ်မီးဝႆႉၼႂ်း Gas1-GFP (GPI-IPC) ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် GPI ဢၼ်ၼႄဝႆႉ ၼႂ်းသႅၼ်းလိူင်းလႄႈ ၸိူဝ်ႉၽၼ်း GhLag1p ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶေႃႈမုၼ်းၼၼ်ႉ တၢင်တူဝ် ႁူဝ်ပၢၵ်ႇ ၶေႃႈမုၼ်း IPC တင်းမူတ်း။ ၽတ်ႉၽဵင်ႇ လွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်းလွတ်ႈလႅဝ်း ႁႃႈဢၼ်။ ႁၢဝ်းၽိတ်း = SD ။ t test ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵူႈသွင်ႁွႆး။ ns ဢမ်ႇလမ်ႇလွင်ႈ။ P = 0.9134 ။ (B) ၶႅပ်းႁၢင်ႈဢၼ်လႅင်းဢွၵ်ႇ ဢၼ်လဵၵ်ႉၼွႆႉ ၶွင် sec31-1၊ sec31-1 GhLag1၊ sec31-1emp24Δ၊ sec31-1ted1Δ လႄႈ sec31-1lst1Δ သႄးလ် ဢၼ်ၼႄပၼ် ၵႃႇလႅၵ်ႉတူဝ်ႇသ် ဢၼ်ႁဵတ်းႁႂ်ႈပဵၼ်မႃး ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ၼၼ်ႉ လႆႈၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 37°C လႄႈ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 37°C လႄႈ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 37°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 30°C လႄႈ တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 30°C ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ 24°C ယဝ်ႉ၊ ၵၢင်ႇသီၶဵဝ် - ၸုမ်း ER ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ။ ၵၢင်ႇပိုတ်ႇ: Gas1-GFP ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵွင်ၼၼ်ႉ မၼ်းၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼိူဝ်ၽိဝ်ၼင် ER တင်းမူတ်းသေ ၼႄပၼ် လွင်ႈ ER ဢၼ်မီးၽၢင်ႁၢင်ႈ ၼျူႇၶလီးယႃး ဢၼ်ပဵၼ်သီလမ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ သၵႄးလ် 5μm ။ (C) လွင်ႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဢၼ်ၼႄဝႆႉ ၼႂ်း (B) ၼၼ်ႉ။ ႁူဝ်ပၢၵ်ႇၽတ်ႉၽဵင်ႇ သႄးလ် ဢၼ်မီး လွင်ႈၵေႃႇသၢင်ႈ Gas1-GFP ဢၼ်မီး တီႈၸုတ်ႇ။ ၼႂ်းလွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်းလွတ်ႈလႅဝ်းသၢမ်ဢၼ်ၼၼ်ႉ n≥300 သႄးလ်။ ႁၢဝ်းၽိတ်း = SD ။ t test ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵူႈသွင်ႁွႆး။ **** ၽ <0.0001။
တႃႇတေၵႄႈလိတ်ႈပၼ်ႁႃၼႆႉ ၵမ်းသိုဝ်ႈၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈႁဵတ်းလွင်ႈၼႄႁၢင်ႈ SCLIM ၶွင် Gas1-GFP လႄႈ Mid2-iRFP ၼႂ်း GhLag1 ဢၼ်မီး ဢႄးလီႇလီႇ ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႈ ဢၼ်ႁူႉလႆႈ လွင်ႈမႆႈ sec31-1 (ႁၢင်ႈ 4 လႄႈ ၸိူင်း S4) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ER ၼၼ်ႉ လႆႈသိမ်းဝႆႉ တီႈ 37°C သေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ လႆႈဢွၵ်ႇမႃး တီႈ 24°C ယဝ်ႉၼၼ်ႉ Gas1-GFP ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇၼၼ်ႉ ၵမ်ႈၼမ် ဢမ်ႇလႆႈ ႁူမ်ႈၵၼ်သေ ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER ၼၼ်ႉ မိူၼ်ၼင်ႇ မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း မိူဝ်ႈၵွၼ်ႇၼၼ်ႉ လႆႈႁၼ် (ႁၢင်ႈ 4, A လႄႈ B ) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လိူဝ်ၼၼ်ႉ ႁူဝ်ပၢၵ်ႇ ERES ဢၼ်ယႂ်ႇ (67%) ၼၼ်ႉ ပႃးၵုၼ်ႇသိၼ် သွင်မဵဝ်း ဢၼ်ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉ ၼႂ်းမၼ်းၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႈ 4D)။ ၽႅၼ်ႇ 1 လႄႈ 2 ၶွင် ႁၢင်ႊ 4C ၼႆႉ ၼႄဝႆႉ တူဝ်ယၢင်ႇ ERES သွင်ဢၼ် ဢၼ်မီး Gas1-GFP လႄႈ Mid2-GFP ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လိူဝ်ၼၼ်ႉ ၶူဝ်းၶွင်တင်းသွင်ဢၼ်ၼႆႉ လႆႈၵဵပ်းႁွမ်ဝႆႉ ၼႂ်း ERES ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ် (ႁၢင်ႈ 4E, ၽႅၼ်ႇ 3 လႄႈ ၸိူင်း S4) ၼႆယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉၼၼ် ၶေႃႈတွပ်ႇႁဝ်းၶႃႈ ၼႄဝႃႈ တၢင်းယၢဝ်း သၢႆသဵၼ်ႈသၢႆ ceramide acyl ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER ၼႆႉ ပဵၼ်လွင်ႈတႅပ်းတတ်း ဢၼ်လမ်ႇလွင်ႈ တႃႇ ER ပရူဝ်ႇတိၼ်း တေႁူမ်ႈႁွမ်းၵၼ် လႄႈ တေၸႅၵ်ႇၽႄလႆႈ ၼႆယဝ်ႉ။
သႄးလ် Sec31-1 GhLag1 ဢၼ်ၼေဝႆႉ လွင်ႈထွၼ်ဢွၵ်ႇ ဢၼ်ပဵၼ်မႃးယွၼ်ႉ ၵႃႇလႅၵ်ႉတူဝ်ႇ၊ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP (GPI-AP၊ သီၶဵဝ်) လႄႈ Mid2-iRFP (TMP၊ သီၶဵဝ်) လႄႈ ဢၼ်ပႃးၼႂ်း ERES ဢၼ်မီးမၢႆတွင်း Sec13-mCherry (ERES၊ သီၶဵဝ်) ဢၼ်ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 37°C ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ သိုပ်ႇႁဵတ်းၵႂႃႇ 30 မိၼိတ်ႉ လူတ်းလူင်းထိုင် 24°C ႁႂ်ႈဢွၵ်ႇၼမ်ႉၼူမ်း ယဝ်ႉၵေႃႈ ဢဝ် SCLIM သေ ထႆႇၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဝၢႆးသေ 20 မိၼိတ်ႉ။ (A ထိုင် C) ႁၢင်ႈၽၢင်လၢမ်းၶၢတ်ႈ 2D ဢၼ်တၢင်တူဝ် (A; scale bar, 1μm) ဢမ်ႇၼၼ် ႁၢင်ႈၽၢင်ၶိုင်ႈလုမ်ႈၾႃႉ 3D cell (B လႄႈ C; scale unit, 0.45μm) ၶွင် 10 တွၼ်ႈ z ဢၼ်မၢႆဝႆႉလူၺ်ႈ cargo လႄႈ ERES။ ၽႅၼ်ႇတႂ်ႈ တီႈ (B) လႄႈ ၽႅၼ်ႇတီႈ (C) ၼၼ်ႉ ၼႄဝႆႉ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဢၼ်ႁဵတ်းၵၢၼ်ဝႆႉ တႃႇၼႄ ၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်မီးဝႆႉ ၼႂ်း ERES (သီၶဵဝ်) [Gas1-GFP (သီၶဵဝ်) လႄႈ Mid2-iRFP (သီၶဵဝ်လႅင်း)] ၼၼ်ႉၵွၺ်း။ (C) ၵၢင်ႇတဵမ်သီၶဵဝ် - ERES ၊ ပိုတ်ႇၵၢင်ႇ - ERES ၼႆႉ ပႃးဝႆႉ ၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်လဵဝ်ၵွႆး။ ၽႅၼ်ႇတႂ်ႈ - ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉ မီးၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉ (1 လႄႈ 2) ဢၼ်မၢႆဝႆႉ တီႈ (C) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ သၵႄးလ် 100 nm ။ (D) လွင်ႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ ဢၼ်ၼႄဝႆႉ ၼႂ်း (C) ၼၼ်ႉ။ ၼႂ်းယူင်ႉၵၢၼ် GhLag1 sec31-1 လႄႈ sec31-1 ၼၼ်ႉ ပႃးဝႆႉ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်လဵဝ်ၵွႆး (Gas1-GFP ဢမ်ႇၼၼ် Mid2-iRFP) လႄႈ ႁူဝ်ပၢၵ်ႇ ERES ၽတ်ႉၽဵင်ႇ တႃႇၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်မီးႁင်းၶေႃ လႄႈ ၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းၵၢၼ်ၸၢမ်းတူၺ်း ဢၼ်လွတ်ႈလႅဝ်း သၢမ်ဢၼ်ၼၼ်ႉ n = 432 ၼႂ်း 54 သႄးလ် (sec31-1) လႄႈ n = 430 ၼႂ်း 47 သႄးလ် (sec31-1 GhLag1) ၼႆယဝ်ႉ။ ႁၢဝ်းၽိတ်း = SD ။ t test ဢၼ်ဢမ်ႇမီးၵူႈသွင်ႁွႆး။ *** ၽီႇ = 0.0002 (သႅၵ်ႉ31-1) လႄႈ ** ၽီႇ = 0.0031 (သႅၵ်ႉ31-1 ၵျီႇလႃႇၵျီႇ1) ၼႆယဝ်ႉ။ (E) ၶႅပ်းႁၢင်ႈ 3D ၶွင် ERES ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉ ဢၼ်မီးၵုၼ်ႇသိၼ် ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉ (3) ဢၼ်မၢႆဝႆႉ တီႈ (C) ၼၼ်ႉ။ Gas1-GFP (သီၶဵဝ်) လႄႈ Mid2-iRFP (သီသွမ်ႇ) ၼႆႉ လုၵ်ႉတီႈၽၢႆႇလဵဝ်ၵၼ်သေ ၶဝ်ႈၸူး ERES (သီၶဵဝ်) သေ ယူႇဝႆႉ တီႈဢၼ် ERES ႁၢမ်ႈတၢပ်ႈဝႆႉၼၼ်ႉ မိူၼ်ၵၼ်။ သၵႄးလ် 100 nm ။
လွင်ႈလဵပ်ႈႁဵၼ်းဢၼ်ၼႆႉ ပၼ်လၵ်းထၢၼ်ၵမ်းသိုဝ်ႈ တီႈတူဝ်မီးၸႂ် ဢၼ်ဝႃႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉၼၼ်ႉ လႆႈၸႅၵ်ႇၽႄဝႆႉ ပဵၼ် ၼႃႈတီႈ ဢၼ်လိူၵ်ႈဝႆႉ တႃႇသူင်ႇဢွၵ်ႇ ၼႂ်းသဵၼ်ႈတၢင်း secretory ၼၼ်ႉသေ ၼႄပၼ် လွင်ႈလမ်ႇလွင်ႈၶွင် တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်း acyl တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈလိူၵ်ႈၸႅၵ်ႇၽႄၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်းလွၵ်းလၢႆး မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်မီးႁႅင်းလႄႈ ဢၼ်ၶိုတ်းၵၢပ်ႈ ဢၼ်ႁွင်ႉဝႃႈ SCLIM ၼၼ်ႉသေ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈၼႄဝႆႉ လွင်ႈႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႂ်ႇ Gas1-GFP (ၽီႉ plasma ဢၼ်လမ်ႇလွင်ႈ GPI-AP ဢၼ်မီး acyl membrane chain (C26) ceramide lipid portion ဢၼ်ယၢဝ်းၼႃႇ) ၼႂ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ ) ၽွင်းမိူဝ်ႈ ပိုၼ်ႉတီႈဢၼ်ၵွင်ႉၵၼ်ဝႆႉ ၼႂ်း transmbrame ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇၸွမ်း ERES ဢၼ်ၸႅင်ႈလႅင်း၊ ၽိဝ်ၼင် ER (ႁၢင်ႈ 1)။ လိူဝ်ၼၼ်ႉ ၶူဝ်းၶွင်သွင်မဵဝ်းၼႆႉ ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ERES ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ လိူၵ်ႈဢဝ် (ႁၢင်ႈ 2)။ တၢင်းယၢဝ်းသဵၼ်ႈသၢႆ acyl ၶွင် သႄးလ် ceramide ၼႂ်းၽီႉၼၼ်ႉ လႆႈလူတ်းယွမ်းလူင်း တီႈ C26 ထိုင် C18-C16 သေ ၸုမ်း Gas1-GFP လႆႈၵူၼ်ႇပင်းၵႂႃႇ ၼႂ်းပိုၼ်ႉတီႈ ER ဢၼ်ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉသေ Gas1-GFP လႆႈၶိုၼ်းမႄးသဵၼ်ႈတၢင်း တႃႇဢွၵ်ႇ ER တင်း ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽီႉၼၼ်ႉ လတ်းၽၢၼ်ႇ ERES ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႊ 3 လႄႈ ႁၢင်ႊ 3)။ 4)။
ပႅၵ်ႉသမ်ႉဝႃႈ GPI-AP ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆး ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ၶိုၵ်ႉတွၼ်း တႃႇဢွၵ်ႇ ER သေတႃႉ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈႁၼ်ဝႃႈ လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇလႆႈပိုင်ႈဢိင်ၼိူဝ် လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ပႅၵ်ႇပိူင်ႈၵၼ် ဢၼ်တေၸၢင်ႊ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ERES ၶိုၵ်ႉတွၼ်း (ႁၢင်ႊ S4 လႄႈ S5) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈတႅၼ်းမၼ်း လွင်ႈၶူၼ်ႉႁၼ်ႁဝ်းၼႆႉ ၵမ်ႉထႅမ်ပၼ် လွၵ်းလၢႆးၸႅၵ်ႇၽႄ တၢင်ႇဢၼ် ဢၼ်လႆႈၶၢႆႉၸူး လွင်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ လႄႈ ဝၢႆးလိုၼ်းမႃး လွင်ႈထွၼ်ဢွၵ်ႇ ၵုၼ်ႇတၢင်ႇဢၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈဢၼ်ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈပႂ်ႉတူၺ်းၼၼ်ႉ ၼႄဝႃႈ တီႈ Gas1-GFP ဢမ်ႇၼၼ် ၸုမ်းဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ERES ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉ ဢမ်ႇမီး ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ၽိဝ်ၼင် Mid2-iRFP ဢၼ်ၼႄဝႃႈ ၸုမ်း GPI-AP ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ၼၼ်ႉ တေႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၶဝ်ၶဝ်ႈမႃးလႆႈ ၼႂ်း ERES ဢၼ်ၵဵဝ်ႇၵပ်းၼၼ်ႉ ငၢႆႈလူမ်ၸႂ်သေ ၼႂ်းၶၢဝ်းယၢမ်းလဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇပႃး ၽိဝ်ၼင်ဢၼ်ၼႆႉ လႄႈ ၽိဝ်ၼင် The 2)။ ပေႃးမႃးၼိူင်းတူၺ်းၼႆ လွင်ႈဢၼ် C18-C16 ceramides မီးဝႆႉ ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ER ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇႁဵတ်းႁႂ်ႈ GPI-AP ပဵၼ်မႃး ပိုၼ်ႉတီႈ ဢမ်ႇၼၼ် ၸုမ်းၵွင် ၼႆလႄႈ ၶဝ်ဢမ်ႇဢဝ်ဢွၵ်ႇပႅတ်ႈ ဢမ်ႇၼၼ် ဢဝ်တႅၼ်းတီႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃး တီႈၽိဝ်ၼင် ERES ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႈ 3 လႄႈ 4)။ ။ ယွၼ်ႉၼၼ် ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈတၢင်ႇၼေဝႃႈ C26 ceramide ၼႆႉ မၼ်းႁဵတ်းႁႂ်ႈ လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ လႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ လူၺ်ႈ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ERES ၼၼ်ႉ ငၢႆႈလူမ်ၸႂ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
တေႁဵတ်းႁိုဝ် ႁႂ်ႈလႆႈ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ၼႆႉ ႁႂ်ႈပဵၼ် ပိုၼ်ႉတီႈ ER ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉ။ ၽီႉ ceramide ၼႆႉ မၼ်းတေၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ ၽၢႆႇလင်သေ ၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ GPI-AP လႄႈ C26 ceramide ပဵၼ်မႃး ထၢတ်ႈယႂ်း ဢၼ်လဵၵ်ႉသေ ၶပ်ႉဝႆႉ ၵမ်းလဵဝ် တီႈၼႂ်း သိင်ႇဝႅတ်ႉလွမ်ႉ ယႂ်းၼိူဝ်ႉ ဢၼ်ဢမ်ႇၽဵၼ်ႈၽဵၼ်ႈ တီႈၽီႉ ER ဢၼ်ပႃး glycerolipids ဢၼ်ပွတ်း လႄႈ ဢမ်ႇၸိုၼ်ႈသႂ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၵွင်ၶိုၵ်ႉတွၼ်း (17, 18)။ ၸုမ်းၸူဝ်ႈၶၢဝ်းဢွၼ်ႇၸိူဝ်းၼႆႉ ဝၢႆးသေ ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း p24 complex (34) ယဝ်ႉ ၸၢင်ႊႁူမ်ႈၵၼ်ပဵၼ် ၸုမ်းယႂ်ႇ ဢၼ်ၼိမ်သဝ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဢၼ်ၵိုင်ႇငၢမ်ႇၵၼ်တင်းလွင်ႈၼႆႉသေ ႁဝ်းၶႃႈၼႄဝႃႈ C26 Gas1-GFP ၼႆႉ လူဝ်ႇလႆႈၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း p24 complex တႃႇတေပဵၼ်မႃး ၸုမ်းဢၼ်ႁၼ်လႆႈ ဢၼ်ယႂ်ႇလိူဝ်ၼၼ်ႉ (ႁၢင်ႈ 3)။ p24 complex ၼႆႉပဵၼ် heterozygous oligomer ဢၼ်ပႃးဝႆႉ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ p24 ဢၼ်ပႅၵ်ႇပိူင်ႈၵၼ် သီႇဢၼ် ၼႂ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ (35) ဢၼ်ပၼ် လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ဢၼ်ၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၵွင်ႉၵၢႆႇၶၢမ်ႈ ၸုမ်း GPI-AP ဢၼ်လဵၵ်ႉသေ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ၸုမ်း Stable ဢၼ်ယႂ်ႇ (34) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇတေႃႇ ၼႂ်းၵႄႈ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ ectodomains ၶွင် GPI-APs ၼႆႉ ၸၢင်ႊၵမ်ႉၸွၺ်ႈတေႃႇ လွင်ႈၶဝ် ၸုတုမ်ၵၼ်လႆႈ မိူၼ်ၼင်ႇ ၼေဝႆႉ ၽွင်းၶဝ် တေႃႉသူင်ႇ Golgi ၶဝ် တီႈၼႂ်း သႄးလ် ဢၼ်ပဵၼ် ၸဵင်ႇ တီႈတူဝ်လဵင်ႉၼူမ်း (36) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၵူၺ်းၵႃႈ မိူဝ်ႈ C18-C16 သႄႇရႃႇမၢႆႉ မီးဝႆႉၼႂ်း ၽိဝ်ၼင် ER ၼၼ်ႉ မိူဝ်ႈ p24 ၶွမ်ႇပလႅၵ်ႉ ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း Gas1-GFP ၼၼ်ႉ တေဢမ်ႇပဵၼ်မႃး ၸုမ်းယႂ်ႇ ဢၼ်ၽၢတ်ႇၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွၵ်းလၢႆးဢၼ်မီးတႂ်ႈမၼ်းၼၼ်ႉ မၼ်းတေဢိင်ၼိူဝ် ၼမ်ႉၵတ်ႉပၢႆးႁၢင်ႊလႄႈ ပၢႆးထၢတ်ႈ ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈ ၶွင် acyl chain ceramide ဢၼ်ယၢဝ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၵၢၼ်လဵပ်ႈႁဵၼ်း ပၢႆးတူဝ်ၸႂ် ၶွင် ၽီႉဢၼ်ႁဵတ်းဢဝ်ၼၼ်ႉ ၼႄဝႃႈ ပိၵ်ႉသမ်ႉဝႃႈ ဢႅတ်ႉသိတ်ႉ သဵၼ်ႈသၢႆယၢဝ်း (C24) လႄႈ သဵၼ်ႈသၢႆပွတ်း (C18-C16) တင်းသွင်ဢၼ်ၼႆႉ ၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ ၶၵ်ႉတွၼ်ႈမၼ်းသေတႃႉ ဢႅတ်ႉသိတ်ႉ သႄးရႃႇမၢႆႉ (C24) ဢၼ်ယၢဝ်း (C24) ၼၼ်ႉၵွၺ်း ၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ လွင်ႈၵူင်ႇသုင် လႄႈ လွင်ႈၵူင်ႇၶႅပ်းငဝ်းတူင်ႉ ၶိုၼ်းမႄးႁၢင်ႈၽၢင် ၸိူင်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လူၺ်ႈလွင်ႈဢိင်ဢၢင်ႈၵၼ် (17၊ 37၊ 38)။ လႆႈၼေဝႆႉဝႃႈ ႁိင်ႇလိၵ်ႉ ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင် TMED2 ဢၼ်ပဵၼ် ၽိဝ်ၼင်ၵူၼ်း ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်တင်း Emp24 ၼၼ်ႉ လိူၵ်ႈဢဝ် လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇ တင်း သၽိၼ်ႇၵူဝ်ႇမၢႆႇလိၼ်ႇ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C18 ceramide တီႈၼႂ်း လွတ်ႇလိူတ်ႈ ဢၼ်မီးၼႂ်း သၢႆႇတူဝ်ႇပလႅတ်ႉသမ်ႇ (39) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်း မေႃႇလီႇၵျူး လႅၵ်ႈလၢႆႊ (MD) သေ ႁဝ်းၶႃႈ လႆႈႁၼ်ဝႃႈ C18 လႄႈ C26 တင်းသွင်ဢၼ်ၼႆႉ မၼ်းၸုတုမ်ဝႆႉ ႁိမ်းႁွမ်း လွတ်ႇလိူတ်ႈ ဢၼ်မီးတီႈ ၽိဝ်ၼင် Emp24 ၼၼ်ႉသေ ၶဝ်မီးလွင်ႈ ၵျိူၵ်ႈမိူၼ်ၵၼ် (ႁၢင်ႈ S6) ၼႆယဝ်ႉ။ ဢၼ်လီမၢႆတွင်းတႄႉ ဢၼ်ၼႆႉ မၼ်းၼႄဝႃႈ ႁိင်ႇ ဢၼ်လတ်းၽၢၼ်ႇ ၽိဝ်ၼင် Emp24 ၼၼ်ႉ ၸၢင်ႊႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၼမ်ႉၼၵ်း ၼႂ်းၽိဝ်ၼင် ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ဢမ်ႇမိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဢၼ်ၼႆႉ ပဵၼ်ၶေႃႈတွပ်ႇဢၼ်လႆႈမႃး မိူဝ်ႈပူၼ်ႉမႃး ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် သႄးလ် တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈႁဵတ်းတူဝ်ယင်ႇ MD ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်ၼၼ်ႉၵေႃႈ ၼႄပၼ်လွင်ႈမီး ဢီႇတႃႇလိပ်ႉပိတ်ႉ (40) ၼႆယဝ်ႉ။ ၵွပ်ႈၼၼ် ႁဝ်းၶႃႈ ၸင်ႇထၢင်ႇဝႃႈ C26 ceramide ဢၼ်မီးၼႂ်း သွင်လွတ်ႇ ER26 ၼၼ်ႉ မၼ်းပဵၼ် ဢၼ်မီးလွင်ႈ ၶိုၼ်ႈယႂ်ႇ ၼႂ်းပိုၼ်ႉတီႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ မိူဝ်ႈ GPI-AP ၼႂ်းလွတ်ႇလိူတ်ႈ ၵွင်ႉၵၢႆႇၵမ်းသိုဝ်ႈတင်း p24 ဢၼ်မီး ၼမ်ႉၵတ်ႉ လႄႈ လွင်ႈၸုတုမ် C26 ceramide ႁိမ်းႁွမ်း p24 ၼႂ်းလွတ်ႇလိူတ်ႈ cytoplasmic ၼၼ်ႉ မၼ်းတေၸၢင်ႊ ၵမ်ႉၸွၺ်ႈပၼ် ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ ဢၼ်ၸွမ်းမႃး လႄႈ ၽီႉၵူင်ႇ ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႃး လူၺ်ႈ ၼိဝ်ႉမိုဝ်း (41) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပိုၼ်ႉတီႈ ၽိဝ်ၼင် ER (42) ။ ၶေႃႈမုၼ်းဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးမိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်းၼၼ်ႉ ၵမ်ႉထႅမ်ပၼ် လၢႆးတၢင်းဢၼ်တၢင်ႇၼႄမႃးၼၼ်ႉ (43, 44)။ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ဢၼ်မီးၼမ်ႉၵတ်ႉလၢႆလၢႆဢၼ် ၶွင် oligolectins ၊ ၸိူဝ်ႉမႅင်းတၢင်းပဵၼ် ဢမ်ႇၼၼ် ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈ တၢင်းပဵၼ် glycosphingolipids (GSL) ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် ceramide ၼိူဝ် ၽီႉ plasma ၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ လွင်ႈႁူမ်ႈတုမ် GSL ယႂ်ႇမႃး၊ Iwabuchi ၸႃႉၵႂႃႇ (43) လႆႈႁၼ်ဝႃႈ ပေႃးမီး ၶူၼ်းလေႃး acyl ဢၼ်ယၢဝ်း (C24) ၵူၺ်းၵႃႊ ဢမ်ႇၸႂ်ႈ ၶူၼ်းလေႃး acyl ဢၼ်ပွတ်း (C16) ၼႆၸိုင် ၶူၼ်းလေႃး ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇတင်း GSL lactosylceramide ၼႆႉ တေႁဵတ်းႁႂ်ႈ ပဵၼ်မႃး ၸုမ်းယႂ်ႇ လႄႈ ၽီႉၼင် ဢၼ်ၶဝ်ႈမႃး ၼႂ်းတူဝ် လႄႈ ၶူၼ်းလေႃး ဢၼ်ပဵၼ် ၵႄႈၵၢင် ၼိဝ်ႇၵလီးယႃး ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
တီႈၼႂ်းသႄးလ် ဢၼ်ပဵၼ် ၸဵင်ႇ တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်းၼၼ်ႉ လွင်ႈၶွၼ်ႈတုမ် ၶွင် anti-Golgi network (TGN) တေႃႇထိုင် ၸၼ်ႉ ၽီႉ plasma ဢၼ်မီးတီႈသုင်သုတ်းၼၼ်ႉ ၵုမ်းထိင်းပၼ် လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ လႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ GPI-AP (10, 45) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈႁူမ်ႈႁွမ်းဢၼ်ၼႆႉ လႆႈထုၵ်ႇ GPI-AP oligomerization (36) ၶိုင်ပွင်ဝႆႉသေတႃႉ မၼ်းတေဢိင်ၼိူဝ် တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်းသႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်ႁဝ်းႁၼ်ၼႂ်း မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉယူႇ။ ပႅၵ်ႉသမ်ႉဝႃႈ တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်း GPI-AP ၼႆႉ မီးဝႆႉ ပိုၼ်ႉထၢၼ်ႈ ထၢတ်ႈၼမ်ႉမၼ်း ဢီႇတႃႇသေ ပိူင်ၵေႃႇသၢင်ႈ ထၢတ်ႈမၼ်း ပိူင်ႈၵၼ်တင်း ထၢတ်ႈ acyl chain ceramide ဢၼ်ယၢဝ်းႁႅင်းၼၼ်ႉသေတႃႉ ၵၢၼ်လဵပ်ႈႁဵၼ်း ဢၼ်ပႆႇႁိုင်ၼႆႉ လႆႈႁၼ်ဝႃႈ ထၢတ်ႈၼမ်ႉမၼ်း တင်းသွင်ဢၼ်ၼႆႉ မီးၼမ်ႉၵတ်ႉ ပၢႆးတူဝ် လႄႈ ပၢႆးထၢတ်ႈ ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ် ၸွမ်းၼင်ႇ လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊ လႄႈ ၼႃႈၵၢၼ် (40) ၼႆယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉၼၼ် တွၼ်ႈဢီႇတႃႇ ဢၼ်မီးၼႂ်း သႄးလ် တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်းၼၼ်ႉ တေၸၢင်ႊမိူၼ်ၵၼ်တင်း C26 ceramide ဢၼ်မီးၼႂ်း မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉသေ ပုၼ်ႈၽွၼ်းမၼ်းတႄႉ တေလႆႈၵွင်ႉၵၢႆႇတင်း ceramide ဢၼ်မီးသၢႆယၢဝ်း ၼႂ်းၽီႉၼၼ်ႉ တႃႇတေ ပၼ်ႁႅင်း လွင်ႈႁူမ်ႈႁွမ်း GPI-AP လႄႈ လွင်ႈၸႅၵ်ႇၽႄၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပႅၵ်ႉသမ်ႉဝႃႈ လွင်ႈပဵၼ်လႆႈဢၼ်ၼႆႉ တိုၵ်ႉလူဝ်ႇထတ်းတူၺ်းၵမ်းသိုဝ်ႈသေတႃႉ လွင်ႈၶူၼ်ႉႁၼ်မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်းၼႆႉ ၵမ်ႉထႅမ်ဝႃႈ လွင်ႈတေႃႉသူင်ႇ acyl chain ceramide ဢၼ်ယၢဝ်း တေႃႇထိုင် တူဝ်ၶိင်း Golgi ၼၼ်ႉ ဢမ်ႇလႆႈႁဵတ်းၸွမ်း ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်သူင်ႇပၼ် cytoplasmic ၼၼ်ႉသေတႃႉ မၼ်းဢိင်ၼိူဝ် လွင်ႈႁူမ်ႈပွင်း ၶွင် GPI anchors မိူၼ်ၼင်ႇ မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ယွၼ်ႉၼၼ် လွၵ်းလၢႆး ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႊ ပဵၼ်မႃး ဢၼ်ၵႅတ်ႇၶႄဝႆႉၼၼ်ႉ မိူၼ်ၼင်ႇ လိူၵ်ႈဢဝ် လွင်ႈတေႃႉသူင်ႇ ၸွမ်းၵၼ် ဢႅတ်ႉသိတ်ႉ ၶိူဝ်းသႄႇရႃႇမၢႆႉ ဢၼ်ယၢဝ်းႁႅင်း လႄႈ GPI-AP (13, 16, 20, 46, 47) တီႈၼႂ်း လွတ်ႇတေႃႉသူင်ႇ ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
တီႈၼႂ်း ယိူဝ်ႇလႄႈ တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်း ဢၼ်ပဵၼ် ၸဵင်ႇသႄးလ် ၼၼ်ႉ လွင်ႈႁူမ်ႈႁွမ်း GPI-AP လႄႈ လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ တီႈ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ ၽီႉ plasma တၢင်ႇၸိူဝ်းၼၼ်ႉ ပဵၼ်မႃး မိူဝ်ႈပႆႇထိုင် ၽိဝ်ၼႃႈသႄးလ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပႃႇလႃႇတီႇၼူဝ်ႇ ၸိူဝ်းၼႆႉ။ (48) လႆႈႁၼ်ဝႃႈ တီႈ TGN ၶွင် သႄးလ် ဢၼ်ပဵၼ် ၸဵင်ႇ တူဝ်လဵင်ႉၼူမ်းၼၼ်ႉ လွင်ႈႁဵတ်းပဵၼ် ၵွင် GPI-AP ၼႆႉ ဢမ်ႇၸႂ်ႈဝႃႈ လူဝ်ႇတႃႇ လိူၵ်ႈၸႅၵ်ႇၽႄ GPI-APs တေႃႇထိုင် ၽီႉ plasma ဢၼ်မီးတီႈသုင်သုတ်းၼၼ်ႉၵွၺ်း မၼ်းၵုမ်းထိင်းပႃး လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇ ၸုမ်း GPI-APs လႄႈ လွင်ႈတူင်ႉၼိုင် ပၢႆးၸႂ်မၼ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၽိဝ်ၼႃႈသႄးလ်။ ၼႂ်းမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉ ၵၢၼ်လဵပ်ႈႁဵၼ်းဢၼ်ၼႆႉ ၼႄဝႃႈ ၸုမ်း GPI-AP ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် C26 ceramide ဢၼ်မီးတီႈ ER ၼၼ်ႉ ၸၢင်ႈၵုမ်းထိင်းလႆႈ ၸုမ်းၸုမ်းလႄႈ လွင်ႈတူင်ႉၼိုင် ၵၢၼ်ႁဵတ်းသၢင်ႈ ၶွင် GPI-AP ဢၼ်မီးတီႈ ၽိဝ်ၼင် plasma (24, 49) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸွမ်းၼင်ႇပိူင်ၼႆႉသေ သႄး GhLag1 ၼႆႉ မၼ်းမီးလွင်ႈ ဢႅဝ်ႇလႄႇတေႃႇ ၶိူင်ႈႁႄႉၵင်ႈ GPI ဢမ်ႇၼၼ် ယႃႈယႃ ဢၼ်မီးလွင်ႈတုမ်ႉတိူဝ်ႉတေႃႇ ၽႃသႄး (28) လႄႈ လွင်ႈလူဝ်ႇ ၸုမ်း Gas1-GFP ဢၼ်ႁဵတ်းၵၢၼ် (49) ၶွင် ၸိၵ်း ceramide ဢၼ်လၢမ်းၶၢတ်ႈဝႆႉ ၼႂ်းလွင်ႈၵူပ်ႉၵူႊ သႄးမၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉၼၼ်ႉ ၼေဝႆႉ G ၽွၼ်းယွၼ်ႈ ဢၼ်ၸၢင်ႊပဵၼ်လႆႈ ၽၢႆႇပၢႆးတူဝ် ၶွင် hLag1 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၽိတ်း GPI-AP ။ ၵူၺ်းၵႃႈ လွင်ႈထတ်းသၢင်ထႅင်ႈဝႃႈ လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ၸုမ်းၽိဝ်ၼႃႈသႄးလ်ၼၼ်ႉ လႆႈႁဵတ်းပရူဝ်ႇၵရႅမ်ႇမႃး တီႈ ER လူၺ်ႈလွၵ်းလၢႆးၸႅၵ်ႇၽႄ ဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် တၢင်းယၢဝ်းၶႆမၼ်းၼၼ်ႉႁိုဝ်ၼႆၼၼ်ႉ တေပဵၼ်ႁူဝ်ၶေႃႈ ၵၢၼ်ၶူၼ်ႉၶႂႃႉႁဝ်း မိူဝ်းၼႃႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၸိူဝ်ႉၽၼ်း Saccharomyces cerevisiae ဢၼ်ၸ်ႂႉတိုဝ်းၼ်ႂးၵၢၼ်ဢၼ်ၼႆႉၼၼ်ႉ လႆႈသ်ႂႇဝႆႉၼ်ႂးလွၵ်းသဵၼ်ႈမၢႆ S1 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸိူဝ်ႉၽၼ်း MMY1583 လႄႈ MMY1635 ၶွင် SCLIM တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈထႆႇႁၢင်ႈသႄးဢၼ်မီးၸႂ်ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇႁဵတ်းဝႆႉ တီႈပိုၼ်ႉလင်ၶွင် W303 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸိူဝ်ႉၽၼ်းၸိူဝ်းၼႆႉ ဢၼ်ၼႄဢွၵ်ႇ Sec13-mCherry ဢၼ်မီး ပၢႆႉထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း ဢၼ်လႅင်းလႅင်းၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇႁဵတ်းဢွၵ်ႇမႃး လူၺ်ႈၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆးဢၼ်ဢိင်ၼိူဝ် လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇၶိူဝ်းၶိူဝ်းယႂ်းယႂ်း polymerase (PCR) ဢၼ်မီး pFA6a plasmid ႁႂ်ႈပဵၼ် ပိူင်တႅၵ်ႈ (23) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸိူဝ်ႉဢၼ်ၼႄဢွၵ်ႇ Mid2-iRFP ဢၼ်မီးပၢႆႉဝႆႉၸွမ်း ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်းဢၼ်လႅင်းဢွၵ်ႇ ၽၢႆႇတႂ်ႈလွင်ႈၵုမ်းထိင်းၶွင် ၽူႈပၼ်ႁႅင်း GAL1 ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇၵေႃႇသၢင်ႈဝႆႉမိူၼ်ၼင်ႇပႃႈတႂ်ႈၼႆႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈၶႂၢၵ်ႈၶၵ်ႉတွၼ်ႈ PCR ၶွင် iRFP-KanMx ဢၼ်လုၵ်ႉတီႈ pKTiRFP-KAN vector (ၶွင်တွၼ်ႈၶွင် E. O'Shea ၊ မၢႆပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ Addgene 64687၊ ဝၢႆးသေ ၶပ်ႉၸႅၼ်ႇ ၸီႇၼိူမ်း Mid2-iRFP ၼၼ်ႉ လႆႈၶႂၢၵ်ႈယႂ်ႇမႃးသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈငၢႆးၵၼ်ဝႆႉ တီႈၼႂ်း ၽူႈပၼ်ႁႅင်း GAL1 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ၊ မၼ်းလႆႈထုၵ်ႇ ၸူႉတုမ်ၵၼ်ဝႆႉ တီႈၼႂ်း ၼႃႈတီႈ Not I-Sac I ၶွင် လွင်ႈၸုတုမ် plasmid pRS306 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ pRGS7 ဢၼ်လႆႈမႃးၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇႁဵတ်းႁႂ်ႈပဵၼ်သဵၼ်ႈသၢႆၸွမ်း Pst I တွၼ်ႈတႃႇတေ ႁူမ်ႈလေႃးၵၼ်တၢင်း တီႈယူႇ URA3 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၸိူဝ်ႉၽၼ်းဢၼ်ႁူမ်ႈလေႃးၵၼ်ဝႆႉ Gas1-GFP ၼၼ်ႉလႆႈထုၵ်ႇၼႄဝႆႉၽၢႆႇတႂ်ႈလွင်ႈၵုမ်းထိင်းၶွင် ၽူႈပၼ်ႁႅင်း GAL1 ၼ်ႂး ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ centromere (CEN) ဢၼ်ၵေႃႇသၢင်ႈဝႆႉမိူၼ်ၼင်ႇပႃႈတႂ်ႈၼႆႉယဝ်ႉ။ ၶၵ်ႉတွၼ်ႈ Gas1-GFP ၼႆႉ လႆႈဢဝ် PCR သေ ၶႂၢၵ်ႈပၼ် ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ pRS416-GAS1-GFP (24) (ၶွင်တွၼ်ႈၶွင် L. Popolo) သေယဝ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈငၢႆးမိူၼ် Xma I–Xho I ၶွင် ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ CEN pBEVY-GL LEU2 (ၶွင်တွၼ်ႈၶွင် C) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ မိလ်ႊလိူဝ်ႊ၊ ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ ဢႅတ်ႉၸိၼ်ႇ မၢႆ 51225၊ ဢႅတ်ႉၸိၼ်ႇ 51225၊ RRID: ဢႅတ်ႉၸိၼ်ႇ_51225)။ ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉဢၼ်လႆႈမႃးၼၼ်ႉ လႆႈပၼ်ၸိုဝ်ႈဝႃႈ pRGS6 ၼႆယဝ်ႉ။ ၸိူဝ်ႉၽၼ်းဢၼ်ႁူမ်ႈလေႃးၵၼ်ဝႆႉ Axl2-GFP ၼၼ်ႉၵေႃႈ လႆႈထုၵ်ႇၼႄဝႆႉၽၢႆႇတႂ်ႈလွင်ႈၵုမ်းထိင်းၶွင် ၽူႈပၼ်ႁႅင်း GAL1 ၶွင် pBEVY-GL LEU2 vector ၼၼ်ႉသေယဝ်ႉ၊ လွင်ႈၵေႃႇသၢင်ႈမၼ်းတႄႉပဵၼ်မိူၼ်ၼင်ႇပႃႈတႂ်ႈၼႆႉယဝ်ႉ။ ၶၵ်ႉတွၼ်ႈ Axl2-GFP ၼႆႉ လႆႈထုၵ်ႇ ၶႂၢၵ်ႈဢွၵ်ႇမႃးတီႈ ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉ pRS304-p2HSE-Axl2-GFP (23) လူၺ်ႈလၢႆး PCR သေယဝ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈငၢႆးၵၼ်ဝႆႉ တီႈ Bam HI-Pst I ၶွင် တူဝ်တေႃႉသူင်ႇ pBEVY-GL LEU2 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ပလႅတ်ႉသမိတ်ႉဢၼ်လႆႈမႃးၼၼ်ႉ လႆႈပၼ်ၸိုဝ်ႈဝႃႈ pRGS12 ၼႆယဝ်ႉ။ ၶၵ်ႉတွၼ်ႈၶွင် oligonucleotides ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်းၼ်ႂးလွင်ႈလဵပ်ႈႁဵၼ်းဢၼ်ၼႆႉၼၼ်ႉ လႆႈသ်ႂႇဝႆႉၼ်ႂးလွၵ်းသဵၼ်ႈမၢႆ S2 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၸိူဝ်ႉၽၼ်းၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် ဢႄႇတီႇၼိၼ်ႇ 0.2% လႄႈ ထၢတ်ႈၵလူဝ်ႇၵူဝ်ႇ 2% [YP-dextrose (YPD)] ၊ (YPR)] ဢမ်ႇၼၼ် 2% ၵႃႇလႅၵ်ႉတူဝ်ႇ [YP-galactose (YPG)] ႁႂ်ႈပဵၼ် ငဝ်ႈတိုၼ်း ၵႃႇပုၼ်ႇ ဢမ်ႇၼၼ် ၼႂ်း ၶိူင်ႈႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ဢၼ်ဢေႇသုတ်း (0.15% ၼၢႆႇထရူဝ်ႇၵျိၼ်ႇ ယိူဝ်ႇ လႄႈ 0.5% ဢႅမ်ႇမွၼ်ႇၼိမ်ႇ သႃႇလ်ၾဵတ်ႉ) တႃႇတေ ၽိူမ်ႉထႅမ်ပၼ် ဢႃႇမၢႆၼူဝ်ႇဢႅတ်ႉသိတ်ႉ လႄႈ ပိုၼ်ႉထၢၼ် ဢၼ်ထုၵ်ႇမႅၼ်ႈ ဢၼ်လူဝ်ႇတႃႇ ဢႁႃႇရႃႇ , လႄႈ ပႃး 2% ၵလူဝ်ႇၵူဝ်ႇ ဢၼ်ဢေႇသုတ်း2 ( (ထၢတ်ႈ galactose ဢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ တီႈဢေႇသုတ်း) ႁႂ်ႈပဵၼ် ငဝ်ႈတိုၼ်း ထၢတ်ႈၵႃႇပုၼ်ႇ။
တွၼ်ႈတႃႇလွင်ႈထႆႇႁၢင်ႈၶၢဝ်းယၢမ်းတႄႉတႄႉၼၼ်ႉ၊ သႄးဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႈသၼ်ႇထေႇ sec31-1 ဢၼ်ႁူႉထိုင်တၢင်းမႆႈ ဢၼ်ၼႄလွင်ႈၵေႃႇသၢင်ႈၽၢႆႇတႂ်ႈ ၽူႈပၼ်ႁႅင်း GAL1 ၼၼ်ႉ လႆႈၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ ၼႂ်းၵႄႈ YPR တီႈ 24°C ၶိုၼ်းၼိူင်ႈတေႃႇထိုင် ၸၼ်ႉၵၢင်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ဢဝ်သႂ်ႇၼႂ်း YPG တီႈ 24°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်းယဝ်ႉ သႄးလ်ၸိူဝ်းၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ ၼႂ်း SG တီႈ 37°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 30 မိၼိတ်ႉသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ လႆႈသူင်ႇၵႂႃႇတီႈ 24°C တႃႇတေဢွၵ်ႇမႃးတီႈ secretion block ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း Concanavalin A သေ မႄးဝႆႉ သႄးလ် ဢၼ်မီးၼိူဝ် ၽႅၼ်ႇမၢၼ်ႇသေ ဢဝ် SCLIM သေ ထႆႇႁၢင်ႈဝႆႉ။ SCLIM ၼႆႉ ပဵၼ်မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်မီးသၢႆလႅင်း ပိၼ်ႈၽူၼ် Olympus IX-71 လႄႈ မၢၼ်ႇတူၺ်းၼမ်ႉမၼ်း ဢၼ်မီးႁူးလႅင်း UPlanSApo 100×1.4 (Olympus) ဢၼ်ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉ၊ (Hamamatsu Photonics) ၼႆႉ ၸၢင်ႈႁဵတ်းပၼ် လွၵ်းလၢႆး မၢၼ်ႇတူၺ်း ဢၼ်ၶႂၢၵ်ႈလႆႈ ၵမ်းလိုၼ်းသုတ်း ×266.7 လႄႈ ၵွင်ႈထႆႇ ဢၼ်ဢဝ် သၢႆၾႆးၾႃႉ ၵွင်ႉသၢၼ်ၵၼ်သေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ဢီႇလႅတ်ႇထရွၼ်ႇ ၼမ်မႃး (Hamamatsu Photonics) (21) ၼႆယဝ်ႉ။ ၵၢၼ်ဢဝ်ၶႅပ်းႁၢင်ႈၼႆႉ ဢဝ်ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ ဢၼ်ၶပ်ႉဝႆႉ (Yokogawa Electric) သေ ႁဵတ်းသၢင်ႈ။ တွၼ်ႈတႃႇၶႅပ်းႁၢင်ႈ 3D ၼၼ်ႉ ႁဝ်းၶႃႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈႁဵတ်းၵၢၼ် piezoelectric ဢၼ်ႁဵတ်းဝႆႉ ၸွမ်းၼင်ႇ ၶေႃႈပူင်ၼၼ်ႉသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ မၢၼ်ႇဢၼ်တူၺ်းၼၼ်ႉ သၼ်ႇဝႆ တင်ႈတင်ႈသေ ၵဵပ်းဢဝ် ၶိူင်ႈဢၼ်ႁၼ်လႆႈ ဢၼ်ၵႆၵၼ် 100 nm ၼၼ်ႉ ႁဵတ်းပဵၼ် သဵၼ်ႈသၢႆ။ ၶႅပ်းႁၢင်ႈ Z-stack ၼႆႉ လႅၵ်ႈလၢႆႊပဵၼ် ၶေႃႈမုၼ်း 3D voxel သေယဝ်ႉ လွင်ႈႁဵတ်းသၢင်ႈ ဢၼ်ၽႄႈၸွတ်ႇၵႂႃႇ ၸွမ်းၼင်ႇ သၽေႃးတြႃး ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း တႃႇ မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်မီး ၸုတ်ႇပၼ်ႇၼၼ်ႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း တႃႇႁဵတ်းၵၢၼ် လွင်ႈဢမ်ႇလႅၵ်ႈလၢႆႈ လူၺ်ႈ ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ Volocity (PerkinElmer) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လူၺ်ႈလွင်ႈၸႂ်ႉတိုဝ်း Volocity software တႃႇႁဵတ်း threshold ႁင်းမၼ်း တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈထတ်းသၢင် တီႈယူႇႁူမ်ႈၵၼ်ၼၼ်ႉသေ ERES ဢၼ်ပႃးၵုၼ်ႇသိၼ်ၼၼ်ႉ လႆႈတႅၵ်ႈဝႆႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈထတ်းသၢင်ထႅဝ်ၼႆႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ MetaMorph (ၶိူင်ႈမေႃႇလီႇၵျူး) သေ ႁဵတ်းသၢင်ႈမႃးယဝ်ႉ။
ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ GraphPad Prism သေ တႅပ်းတတ်း လွင်ႈလမ်ႇလွင်ႈ ၽၢႆႇသဵၼ်ႈမၢႆ။ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈထတ်းသၢင် t-test ၶွင် Student ဢၼ်မီးသွင်ၽၢႆႇ လႄႈ လွင်ႈထတ်းသၢင် လွင်ႈပႅၵ်ႇပိူင်ႈ ဢၼ်ပဵၼ်တၢင်းလဵဝ် ၽဵၼ်ႈၽဵၼ်ႈ (ANOVA) ၼၼ်ႉ လွင်ႈပႅၵ်ႇပိူင်ႈ ၼႂ်းၵႄႈၸုမ်းၸိူဝ်းၼၼ်ႉ လႆႈဝူၼ်ႉဝႃႈ မီးလွင်ႈတုမ်ႉယွၼ်ႈ ဢၼ်ထၢင်ႇၸႅင်ႈ ၼိူဝ် P <0.05 (*) ၼႆယဝ်ႉ။
တွၼ်ႈတႃႇ မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်မီးသၢႆလႅင်း ၶွင် Gas1-GFP ၼၼ်ႉ သႄးလ် log phase ၼၼ်ႉ လႆႈၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ ၼႂ်း YPD ၶိုၼ်းၼိူင်ႈသေယဝ်ႉ ဢဝ် centrifugation သေ ၵဵပ်းႁွမ်ဝႆႉသေ သုၵ်ႈသီပၼ် သွင်ပွၵ်ႈ လူၺ်ႈ phosphate buffered saline သေယဝ်ႉ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ ၼိူဝ်ၼမ်ႉၶႅင် တီႈဢေႇသုတ်းမၼ်း 15 မိၼိတ်ႉ ယဝ်ႉၵေႃႈ သိုပ်ႇႁဵတ်းၵႂႃႇ ၽၢႆႇတႂ်ႈ မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ၸွမ်းၼင်ႇ ဢၼ်လႆႈလၢတ်ႈၼႄဝႆႉ မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တႃႇႁပ်ႉႁူႉလႆႈၼၼ်ႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်လဵၵ်ႉ ဢၼ်ပဵၼ် Leica DMi8 (HCX PL APO 1003/1.40 oil PH3 CS) ဢၼ်ပႃး မၢၼ်ႇတူၺ်းဢၼ်တူၺ်းလႆႈ ၶိူင်ႈထတ်း L5 (GFP) ၵွင်ႈထႆႇ Hamamatsu လႄႈ ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ ဢႅပ်ႉပလီႇၵေးသျိၼ်း သုိတ်ႉ X (LAS X) ၸိူဝ်းၼႆႉ။ ။
တူဝ်ယင်ႇၸိူဝ်းၼၼ်ႉ ဢဝ်တူဝ်ယင်ႇ SDS ဢၼ်မီးတီႈ 65°C ၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈမၼ်းဢမ်ႇမိူၼ်ၵဝ်ႇ တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 10 မိၼိတ်ႉသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ် SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) သေ ၽႄဢွၵ်ႇၵႂႃႇယဝ်ႉ။ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈထတ်းသၢင် ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ်ၼၼ်ႉ ဢဝ်တူဝ်ယၢင်ႇ 10 μl သႂ်ႇၼႂ်းသဵၼ်ႈတၢင်းလဵဝ်။ ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁေႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် ဢၼ်ပဵၼ်ငဝ်ႈမၼ်း- ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈ ၵႅတ်ႉသ် 1:3000 ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ 1:3000 ၊ ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် Emp24 ၶွင်ပၢင်တၢႆး ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ 1:500 လႄႈ ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် GFP ၶွင်ပၢင်တၢႆး (ဢၼ်ပဵၼ်ၶွင်တွၼ်ႈတီႈ H. Riezman) ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ 1:3000 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် Pgk1 ဢၼ်ပဵၼ်ၶွင်ၼူၼၼ်ႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်းမႃး တီႈဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ 1:5000 (ဢၼ်ပဵၼ်ၶွင်တွၼ်ႈတီႈ J. de la Cruz) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် ထူၼ်ႈသွင် - ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် ဢၼ်ပဵၼ် ၶူဝ်ႈၶွင် ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် ၶွင်ပႄႉ (HRP) ဢၼ်ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉ ဢၼ်ပဵၼ် ၶူဝ်ႈၶွင်ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈတၢင်းပဵၼ် ပၢင်တၢႆး G (IgG) ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း တီႈၼမ်ႉယႃႈယႃ ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ 1:3000 (Pierce) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း IgG ဢၼ်ႁႄႉၵင်ႈၼူ ဢၼ်ဢဝ် HRP ႁူမ်ႈၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉ ႁႂ်ႈမၼ်းယွမ်ႉသီ 1:3000 (Pierce) ၼႆယဝ်ႉ။ တီႈဢၼ်ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် တုမ်ႉတွပ်ႇၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ်လွၵ်းလၢႆး ၶေးမီးလႅင်း ဢၼ်ပဵၼ် ၶိူင်ႈထၢတ်ႈ SuperSignal West Pico (Thermo Fisher Scientific) သေ သွၵ်ႈႁႃတူၺ်းယဝ်ႉ။
ၸွမ်းၼင်ႇ လႆႈသပ်းလႅင်းၼႄဝႆႉ တီႈ (31) ၼၼ်ႉ လွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်း ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် ဢၼ်ပဵၼ်သၽႃႇဝၼၼ်ႉ လႆႈႁဵတ်းၼိူဝ် တွၼ်ႈ ER ဢၼ်ၶိုၼ်ႈယႂ်ႇမႃးၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းၵႅပ်ႈမၼ်း ဢဝ်ၼမ်ႉယႃႈယႃ TNE သေ သုၵ်ႈပၼ် သႄးလ် မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ [50 mM tris-HCl (pH 7.5)၊ NaCl 150 mM၊ EDTA 5 mM၊ ဢဝ်မၢၵ်ႇၵႅဝ်ႈသေ ၽႃႇတတ်းသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်ၶူဝ်းၶွင် ဢၼ်ၵိုတ်းဝႆႉ ၼႂ်းသႄးလ် လႄႈ မၢၵ်ႇၵႅဝ်ႈၼၼ်ႉ ဢဝ်ဢွၵ်ႇပႅတ်ႈ လူၺ်ႈလၢႆး centrifugation ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်ၼမ်ႉဢၼ်လႆၼိူဝ်မၼ်းၼၼ်ႉ ၶူၼ်းၶဝ်းလေႃးၵၼ် တီႈ 17,000 g တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 15 မိၼိတ်ႉ တီႈ 4°C ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ မၢၵ်ႇႁိၼ်ၼၼ်ႉ ၶိုၼ်းဢဝ်သႂ်ႇၼႂ်း TNE သေ ဢဝ် digitalis saponin သႂ်ႇၼႂ်းမၼ်း ႁႂ်ႈမၼ်းမီး 1% ၵမ်းလိုၼ်းသုတ်း။ ဢဝ်ၼမ်ႉယၢင်ၼၼ်ႉ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်း လူၺ်ႈလွင်ႈပၼ်ႇႁွပ်ႈ တီႈ 4°C သေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်ၶူဝ်းၶွင်ဢၼ်ဢမ်ႇၸိုမ်းလႆႈၼၼ်ႉ ဢဝ်ဢွၵ်ႇပႅတ်ႈ လူၺ်ႈလွင်ႈ ၸုပ်ႇဢွၵ်ႇ တီႈ 13,000 g တီႈ 4°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 60 မိၼိတ်ႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် Gas1-GFP ၼၼ်ႉ ဢွၼ်တၢင်းသုတ်း ဢဝ်မၢၵ်ႇႁိၼ် agarose ဢၼ်ဢမ်ႇမီးသင်ၼၼ်ႉ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 4°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်းသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ် GFP-Trap_A (ChromoTek) ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တီႈ 4°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 3 ၸူဝ်ႈမူင်းယဝ်ႉ။ မၢၵ်ႇၼပ်ႉဢၼ်မီးႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ်ၼၼ်ႉ လႆႈသုၵ်ႈသီပၼ် ႁႃႈပွၵ်ႈ လူၺ်ႈ TNE ဢၼ်ပႃး digoxigenin 0.2% သေ ဢဝ်တူဝ်ယင်ႇ SDS သေ ၸႅၵ်ႇဢွၵ်ႇၼိူဝ် SDS-PAGE သေယဝ်ႉ ဢဝ်ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ်သေ ထတ်းသၢင်တူၺ်းယဝ်ႉ။
ၸွမ်းၼင်ႇ လႆႈၼေဝႆႉ တီႈ (31) ၼၼ်ႉ လွင်ႈတႅပ်းတတ်း လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇၶႂၢင်ၵၼ်ၼၼ်ႉ လႆႈႁဵတ်းၼိူဝ် ER ဢၼ်ၶိုၼ်ႈယႂ်ႇမႃးၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈၵႅပ်ႈမၼ်း ER ဢၼ်ၶိုၼ်ႈယႂ်ႇမႃးၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တင်း 0.5 mM dithiobis(succinimidyl propionate) (ပီႇယႃႇ၊ လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇ ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်ၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် glycine (50 mM လွင်ႈၶွၼ်ႈတုမ် ၵမ်းလိုၼ်းသုတ်း၊ 5 မိၼိတ်ႉ၊ 20°C) သႂ်ႇသေ ႁၢႆၵႂႃႇယဝ်ႉ။
မိူၼ်ၼင်ႇ လႆႈလၢတ်ႈၼႄဝႆႉ မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်း (50) ၼၼ်ႉ လွင်ႈထတ်းသၢင် MS ၶွင် ceramide ၼႂ်းသႅၼ်းလိူင်းလႄႈ ၸိူဝ်ႉၽၼ်း GhLag1 ၼၼ်ႉ လႆႈႁဵတ်းသၢင်ႈမႃးယဝ်ႉ။ ပေႃးလၢတ်ႈၵႂၢင်ႈၵႂၢင်ႈၶႂၢင်ၶႂၢင်ၸိုင် သႄးလ်ၸိူဝ်းၼၼ်ႉ လႆႈယႂ်ႇမႃးထိုင် ၶၵ်ႉတွၼ်ႈ ဢၼ်ပဵၼ် ဢႅၵ်ႉသပူဝ်းၼႅၼ်ႇ (3 တေႃႇထိုင် 4 OD600 units/ml) ၼႂ်း YPD တီႈ 30°C သေ လႆႈၵဵပ်းဢဝ် သႄးလ် 25×107 သႄးလ်ယဝ်ႉ။ လွင်ႈထၢတ်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊထၢတ်ႈၶဝ်ၼႆႉ လႆႈထုၵ်ႇ ဢႅတ်ႉသိတ်ႉ ထရၢႆႉၶလူဝ်ႇရူဝ်ႇဢႅတ်ႉသိတ်ႉ ႁၢမ်ႈတၢပ်ႈဝႆႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၼမ်ႉယႃႈယႃ တႃႇထွင်ဢွၵ်ႇ [ဢီႇတၼေႃး၊ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈထၢတ်ႈ ဢၼ်ပဵၼ် မွၼ်ႇမီႇတီႇလႃႇမိၼ်ႇ [မီႇတႄႇၼေႃး၊ လိုၼ်းသုတ်း ဢဝ်ၼမ်ႉဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးၼၼ်ႉ ၶိုၼ်းဢဝ်သႂ်ႇၼႂ်း ၼမ်ႉယႃႈယႃ ဢၼ်ပဵၼ် ၽွၼ်းလီ [ၶလူဝ်ႇရူဝ်ႇၾူမ်း/မီႇတႄႇၼေႃး/ၼမ်ႉ (2:7:1) + 5 mM ammonium acetate] သေ ​​သႂ်ႇၼႂ်း ၶိူင်ႈထတ်း သၢႆလႅင်း ဢၼ်မီး ၼမ်ႉၼၵ်း ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈပႂ်ႉတူၺ်း လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇလၢႆလၢႆဢၼ် (MRM) ၼႆႉ ႁဵတ်းဝႆႉ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈမၵ်းမၼ်ႈ လႄႈ လွင်ႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ မေႃႇလီႇၵျူး sphingolipid ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶိူင်ႈထတ်းသၢင်သၢႆႁိူဝ်ႈလႅင်း TSQ Vantage ဢၼ်ပဵၼ် သီႇၸဵင်ႇ (Thermo Fisher Scientific) ၼႆႉ ဢဝ်ၵူၼ်းၸၢၵ်ႈ ဢၼ်ပဵၼ် ငဝ်ႈတိုၼ်း ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ဢၼ်လႆၼႃႇၼူဝ်ႇ ဢၼ်ပဵၼ် Nanomate HD (Advion Biosciences, Ithaca, NY) ၼၼ်ႉ မႃးသႂ်ႇဝႆႉ တႃႇထတ်းသၢင် ထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ၼႆယဝ်ႉ။ ႁႅင်းၽႃႇၺႃးၵၼ်ၼႆႉ မၼ်းႁဵတ်းႁႂ်ႈလီသုတ်း တွၼ်ႈတႃႇ မဵဝ်းသႅၼ်း ceramide ၵူႈဢၼ်ဢၼ်ယဝ်ႉ။ ၶေႃႈမုၼ်း MS ၼႆႉ လႆႈမႃး ၼႂ်းၾၢင်ႁၢင်ႈ ဢၼ်လီ။ တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈႁဵတ်းတူဝ်မိူၼ် ပၢႆးၸႂ် ၼိူင်ႈဢၼ်ၼၼ်ႉ လွင်ႈၼေ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉၼႆႉ ပဵၼ် လွင်ႈတႅၵ်ႈ ဢၼ်လွတ်ႈလႅဝ်း သၢမ်ဢၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၸွမ်းၼင်ႇ လႆႈၼႄဝႆႉ တီႈ (31) ၼၼ်ႉ သႄးလ် (800×107) ဢၼ်ၼႄပၼ် Gas1-GFP ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇ ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် ဢၼ်ပဵၼ်သၽႃႇဝၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် တူၵ်းလူင်းၵႂႃႇ ၼႆယဝ်ႉ။ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ဢၼ်မူတ်းသႂ်ၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် SDS-PAGE သေ ၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇသေ သူင်ႇၵႂႃႇတီႈ ၽီႉပႃႇလီႇဝီႇၼီႇလီႇတဵင်းၾလူဝ်ႇရၢႆႉ (PVDF) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ထၢတ်ႈထႅင်ႈႁႅင်းၼိူဝ်ႉၼႆႉ လႆႈႁၼ်လူၺ်ႈ လွင်ႈယွမ်ႉသီ PVDF လူၺ်ႈ amide black ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဢဝ် Gas1-GFP band ၼၼ်ႉ တႅပ်းဢွၵ်ႇမႃးတီႈ PVDF သေ ဢဝ်မီႇတႄႇၼေႃး သုၵ်ႈပၼ် 5 ပွၵ်ႈ လႄႈ ဢဝ်ၼမ်ႉၸၼ်ႉ ၶရူဝ်ႇမႃႇထူဝ်ႇၵရႃႇၽီႇ-MS (LC-MS) ဢၼ်ပဵၼ်ၼမ်ႉၼၼ်ႉ သုၵ်ႈပၼ် ပွၵ်ႈၼိုင်ႈယဝ်ႉ။ လူၺ်ႈလွင်ႈၽုၵ်ႇသွမ်ႈ ၽိဝ်ၼင် ဢၼ်ပႃး 500μl 0.3 M NaOAc (pH 4.0)၊ ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် လႄႈ 500μl ဢၼ်ယွမ်ႉသီမႂ်ႇမႂ်ႇ 1 M သွတ်ႉတီႇယမ်ႇၼၢႆႇထရၢႆႉ ဢၼ်လေႃးၵၼ်ဝႆႉ တီႈ 37°C တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 3 ၸူဝ်ႈမူင်းၼၼ်ႉသေ ပွတ်းတွၼ်ႈယၢင်ယႂ်းၼၼ်ႉ တေဢွၵ်ႇမႃးတီႈ Gas1-GFP လႄႈ ၵလူဝ်ႇသႃႇၼိတ်ႉ ဢၼ်မီးၼႂ်းၵႄႈ ၵလူဝ်ႇသျိၼ်ႇ ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ (51)။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်ၼမ်ႉၸၼ်ႉ LC-MS သေ သုၵ်ႈသီ ၽိဝ်ၼင် 4 ပွၵ်ႈသေ ႁႂ်ႈႁႅင်ႈ တီႈတၢင်းမႆႈၼႂ်းႁွင်ႈသေ သိမ်းဝႆႉ ၼႂ်းလူမ်း ၼၢႆႇထရူဝ်ႇၵျိၼ်ႇ တီႈ -80°C တေႃႇထိုင် ပေႃးလႆႈထတ်းသၢင်တူၺ်း။ ၼင်ႇလွင်ႈၵုမ်းထိင်းၼၼ်ႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း တူဝ်ယင်ႇဢၼ်ဢမ်ႇမီးသင် ၶွင်ၽိဝ်ၼင် PVDF တႃႇလွင်ႈၸၢမ်းတူၺ်းၵူႈဢၼ်ဢၼ်ယဝ်ႉ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ် MS သေ ထတ်းသၢင်တူၺ်း ၼမ်ႉၼၵ်း ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးတီႈ Gas1-GFP ၼၼ်ႉ ၸွမ်းၼင်ႇ လႆႈလၢတ်ႈၼႄဝႆႉ (50) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းၵႅပ်ႈမၼ်း ၶႅပ်း PVDF ဢၼ်ပႃး GPI-lipid ၼၼ်ႉ ၶိုၼ်းဢဝ် ၼမ်ႉယႃႈယႃ ဢၼ်ဢမ်ႇလီ 75μl [ၶလူဝ်ႇရူဝ်ႇၾူမ်း/မီႇတႄႇၼေႃး (1:2) + 5 mM ဢႅမ်ႇမွၼ်ႇၼိမ်ႇဢႅတ်ႉသိတ်ႉ] သေ ပူၼ်ႉၵႂႃႇ လွင်ႈထတ်းသၢင် ဢၢႆႇဢူဝ်ႇၼိတ်ႉ ဢီႇလႅတ်ႇထရူဝ်ႇသပရႄႇ (ESI)-MRM/MS ၶွင် ၸိူဝ်ႉၽၼ်း သၽိၼ်ႇၵူဝ်ႇလိပ်ႉ (TSQ Vantage) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းလွင်ႈၼႆႉ ၶေႃႈမုၼ်း MS ၼႆႉ လႆႈမႃး ၼႂ်းလၢႆး ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ဢၼ်ဢမ်ႇလီၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
မိူၼ်ၼင်ႇ လၢတ်ႈမႃး မိူဝ်ႈဢွၼ်တၢင်းၼၼ်ႉ တွၼ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း ဢၼ်ပဵၼ် ၶိူင်ႈၵမ်ႉၵႅမ် GPI ၼၼ်ႉ လႆႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ တီႈ GPI-AP ဢၼ်မီး မၢႆတွင်း [3H]-inositol (16) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ယႂ်းၼိူဝ်ႉၸိူဝ်းၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် လွၵ်းလၢႆး ၶရူဝ်ႇမႃႇထူဝ်ႇၵရႃႇၽီႇ ဢၼ်မီးထၢပ်ႈမၢင်သေ ၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇမႃးသေ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆး ဢၼ်ယွမ်ႉသီဝႆႉ (55:45:10 ၶရူဝ်ႇရူဝ်ႇၾူမ်း-မီႇတႅၼ်ႇၼေႃး-0.25% KCl) သေ ၸႂ်ႉတိုဝ်း FLA-7000 (Fujifilm) သေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈႁၼ်လႆႈ။
သႄးဢၼ်ၼႄ Gas1-GFP (600×107) ၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် TNE buffer ဢၼ်ပႃး TNE buffer သေ သုၵ်ႈသီပၼ် သွင်ပွၵ်ႈသေ ဢဝ်မၢၵ်ႇၵႅဝ်ႈ ၽႃႇတတ်းသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်မၢၵ်ႇၵႅဝ်ႈ ဢၼ်ၵိုတ်းဝႆႉၼၼ်ႉ ဢွၵ်ႇပႅတ်ႈ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ဢဝ်ၼမ်ႉဢၼ်လႆၼိူဝ်မၼ်းၼၼ်ႉ ၶူၼ်းၶဝ်းလေႃးၵၼ် တီႈ 17,000 g တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်း တီႈ 4°C ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဢဝ်မၢၵ်ႇႁိၼ်ၼၼ်ႉ သုၵ်ႈပၼ်ၼႂ်း TNE သေ ဢဝ် PI-PLC (Invitrogen) 1 U ၼႂ်း TNE ဢၼ်ပႃး တီႇၸီႇတႄႇလီႇသႃႇပူဝ်ႇၼိၼ်ႇ 0.2% ၼၼ်ႉ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉ တႃႇၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်း တီႈ 37°C ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ဢႅၼ်ႇၸႆးမီႇ ႁဵတ်းၵၢၼ်ယဝ်ႉ ဢဝ် ၽိဝ်ၼင် ဢၼ်မီး 17,000 ၵရမ်ႇ တီႈ 4°C ၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ၽိဝ်ၼင် ဢွၵ်ႇမႃး ၶၢဝ်းတၢင်း 1 ၸူဝ်ႈမူင်း။ တႃႇတေႁဵတ်းႁႂ်ႈ ႁႅင်းၶၢမ်ႇတူဝ် ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ၸိုမ်းလူင်းၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ်ၼမ်ႉဢၼ်ၼိူဝ်မၼ်းၼၼ်ႉ ၽုၵ်ႇသွမ်ႈဝႆႉၸွမ်း GFP-Trap_A (ChromoTek) တီႈ 4°C ၶိုၼ်းၼိူင်ႈယဝ်ႉ။ ၵႅတ်ႉသ်1-GFP ဢၼ်မူတ်းသႂ် ဢၼ်ဢဝ် SDS-PAGE ၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ်သီၶဵဝ်ႁိူဝ်ႈလႅင်း Coomassie မႃးယွမ်ႉသီဝႆႉယဝ်ႉ။ ၶွပ်ႇယွမ်ႉသီ Gas1-GFP ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇတတ်းဢွၵ်ႇ တီႈသီၶဵဝ် ဢၼ်လွမ်ႉႁွပ်ႈဝႆႉ လွတ်ႇၼမ်ႉၼၼ်ႉသေ ဝၢႆးသေ ဢဝ် iodoacetamide သေ လူတ်းယွမ်းပၼ် လူၺ်ႈ dithiothreitol ယဝ်ႉ လႆႈႁဵတ်းလွင်ႈယႃႉၵဝ်း ၼႂ်းၵျႄႇလ် လူၺ်ႈ trypsin ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဢဝ် GPI-glycans သေ ထွၼ်ဢွၵ်ႇ လႄႈ ႁႅင်ႈပၼ် ပႅပ်ႉတၢႆႉ လႄႈ ပႅပ်ႉတၢႆႉ ဢၼ်မီး GPI-glycans ၼၼ်ႉ။ ပႅပ်ႉတၢႆႉဢၼ်ႁႅင်ႈၼၼ်ႉ ဢဝ်ၼမ်ႉ 20 μl မႃးယွမ်ႉသႂ်ႇ။ သမ်းသႂ်ႇၼႂ်း LC ၼၼ်ႉ ပွတ်းၼိုင်ႈ (8μl) ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း သဝ် octadecylsilane (ODS) (Develosil 300ODS-HG-5; တၢင်းယၢဝ်းတၢင်းၼႂ်း 150 mm×1.0 mm; ၶေးမီး Nomura ၊ ၸေႊမိူင်း Aichi မိူင်းၵျႃႇပၢၼ်ႇ) တႃႇၽႄဢွၵ်ႇ ပႅပ်ႉတၢႆႉ ၽၢႆႇတႂ်ႈငဝ်းလၢႆး ဢၼ်မီးလွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႈ ဢၼ်တႅတ်ႈၼႅတ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၽၢႆႇဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႈလႆႈၼၼ်ႉ ပဵၼ် ၶိူင်ႈယွမ်ႉ A (0.08% ၾူမ်းဢႅတ်ႉသိတ်ႉ) လႄႈ ၶိူင်ႈယွမ်ႉ B (0.15% ၾူမ်းဢႅတ်ႉသိတ်ႉ ၼႂ်း 80% ဢႅတ်ႉသိတ်ႉၼိတ်ႉရၢႆႉ) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ပိူင် Accela HPLC (Thermo Fisher Scientific ဝဵင်း Boston ၊ ၊မိူင်းဢမေႇရိၵၢၼ်ႇ)။ ၼမ်ႉယၢင်ဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ်ၶဝ်ႈမႃးၼႂ်း ငဝ်ႈတိုၼ်း ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ESI ယူႇတႃႇသေႇသေယဝ်ႉ ပႅပ်ႉတၢႆႉ လႄႈ ပႅပ်ႉတၢႆႉ ဢၼ်ပႃး GPI-glycans ၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇထတ်းသၢင်လူၺ်ႈ LTQ Orbitrap XL (ၶိူင်ႈထတ်းသၢင် သၢႆလႅင်း ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ဢၼ်ပဵၼ်သဵၼ်ႈသၢႆ ဢၼ်ႁူမ်ႈပွင်းၵၼ်ဝႆႉ၊ Thermo Fisher Scientific) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ တီႈၼႂ်း MS setup ၼၼ်ႉ ႁႅင်းၾႆးၾႃႉ ဢၼ်ပဵၼ် ငဝ်ႈတိုၼ်း သၢႆၼမ်ႉ ၼၼ်ႉ လႆႈတမ်းဝႆႉ 4.5 kV သေ တၢင်းမႆႈ သၢႆၼမ်ႉ ဢၼ်သူင်ႇပၼ်ၼၼ်ႉ လႆႈဝႆႉ 300°C ၼႆယဝ်ႉ။ ႁႅင်းၾႆးၾႃႉ ၶႅပ်ႇပီႇလႃႇ လႄႈ ႁႅင်းၾႆးၾႃႉ မၢၼ်ႇတူၺ်း လွတ်ႇၼၼ်ႉ လႆႈတမ်းဝႆႉ 15 V လႄႈ 50 V ၼႆယဝ်ႉ။ ၶေႃႈမုၼ်း MS ၼႆႉ လႆႈမႃး ၼႂ်းလၢႆး ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ဢၼ်ပဵၼ် ၽွၼ်းလီ (လွင်ႈၶႅမ်ႉလႅပ်ႈ 60,000၊ လွင်ႈတႅတ်ႈၼႅတ်ႈ ၽုင် 10 တွၼ်ႈ ၼႂ်းၼိုင်ႈလၢၼ်ႉ) ၼႂ်းၵႄႈ ၽုင် 300/m/z ၽုင်/ႁႅင်းထၢတ်ႈ (m/z) 3000 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈၽႃႇၺႃးၵၼ် ဢၼ်ႁဵတ်းႁႂ်ႈပဵၼ်မႃး လွင်ႈၽၢတ်ႇဢွၵ်ႇ (CID)]။
လွင်ႈႁဵတ်းတူဝ်ယၢင်ႇ MD ၼႆႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈၸၢၵ်ႈ GROMACS (52) လႄႈ ႁႅင်း MARTINI 2 (53-55) သေ ႁဵတ်းသၢင်ႈမႃးယဝ်ႉ။ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈႁဵတ်းၽိဝ်ၼင် CHARMM GUI (56, 57) သေ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ ၽိဝ်ၼင်သွင်ထၢပ်ႈ ဢၼ်ပႃး ထၢတ်ႈ တီႇဢူဝ်ႇလီႇယူဝ်ႇၾူတ်ႉၾႅတ်ႉတီႇတီးလ်ၶူဝ်ႇလိၼ်ႇ (DOPC) လႄႈ Cer C18 ဢမ်ႇၼၼ် DOPC လႄႈ Cer C26 ၼႆယဝ်ႉ။ လွင်ႈပိူင်ပဵၼ် လႄႈ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇၶွင် Cer C26 ၼႆႉ လႆႈမႃးတီႈ DXCE လူၺ်ႈလွင်ႈဢဝ်ဢွၵ်ႇ မၢၵ်ႇၼပ်ႉဢၼ်လိူဝ် တီႈႁၢင်ႊ sphingosine ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လၢႆးႁဵတ်းလၢႆးသၢင်ႈ ဢၼ်လၢတ်ႈၼႄဝႆႉ ၽၢႆႇတႂ်ႈၼႆႉသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ သွင်ထၢပ်ႈ ၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ်သေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈမၼ်း ႁဵတ်းၵၢၼ် ယဝ်ႉၵေႃႈ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶူဝ်ႇဢေႃးတီႉၼဵၵ်ႉ ၵမ်းလိုၼ်းသုတ်း ၶွင် လွၵ်းပိူင်ၼၼ်ႉသေ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ လွၵ်းပိူင် ဢၼ်ပႃး Emp24 ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႃႈလိၼ် ဢၼ်လႅၵ်ႈလၢႆႊပဵၼ် ၽိဝ်ၼင် ၶွင် မၢၵ်ႇၸိူဝ်ႉ Emp24 (ဢၼ်ၵိုတ်းဝႆႉ 173 တေႃႇထိုင် 193) ၼၼ်ႉ လႆႈႁဵတ်းဝႆႉ မိူၼ်ၼင်ႇ α-helix ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈမိုဝ်း MD (VMD) ဢၼ်ႁၼ်လႆႈ လွင်ႈၵေႃႇသၢင်ႈ မေႃႇလီႇၵျူး (58) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ဢဝ်ဢွၵ်ႇပႅတ်ႈ ထၢတ်ႈယႂ်းၼိူဝ်ႉ ဢၼ်သွၼ်ႉၵၼ်ဝႆႉၼၼ်ႉယဝ်ႉ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်းၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် CHARMM GUI သေ သႂ်ႇၼႂ်းထၢပ်ႈသွင်ထၢပ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွၵ်းပိူင်လိုၼ်းသုတ်းၼႆႉ ပႃးဝႆႉ 1202 DOPC လႄႈ 302 Cer C26 ဢမ်ႇၼၼ် 1197 DOPC လႄႈ 295 Cer C18 လႄႈ Emp24 ၼႆယဝ်ႉ။ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ ဢၢႆႇယွၼ်ႇ ၼႂ်းပိူင်ၼၼ်ႉ မီးၼမ်ႉၼၵ်း 0.150M ။ ႁဵတ်းတူဝ်မိူၼ်လွတ်ႈလႅဝ်းသီႇဢၼ် တွၼ်ႈတႃႇ လွင်ႈႁူမ်ႈပွင်းသွင်ထၢပ်ႈၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၼမ်ႉၼၵ်းသွင်ထၢပ်ႈၼႆႉ လႆႈၸႂ်ႉတိုဝ်း လၢႆးႁဵတ်းသၢင်ႈ CHARMM GUI သေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ် ဢၼ်ပႃးလွင်ႈ ႁဵတ်းႁႂ်ႈဢေႇသုတ်းသေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ႁဵတ်းႁႂ်ႈၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ် 405,000 ၶၵ်ႉတွၼ်ႈ တီႈဢၼ် လွင်ႈၶွင်ႉၶမ် တီႈယူႇ လႆႈလူတ်းယွမ်း လႄႈ လႆႈယႃႉပႅတ်ႈ လွႆးလွႆးသေ ၶၵ်ႉတွၼ်ႈၶၢဝ်းယၢမ်း လႆႈၶိုၼ်ႈမႃး တီႈ 0.005 ps ထိုင် 0.02 ps ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ်ယဝ်ႉ မၼ်းႁဵတ်းဢွၵ်ႇ 6 μs ဢၼ်မီးၶၵ်ႉတွၼ်ႈၶၢဝ်းယၢမ်း 0.02 ps ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ဝၢႆးသေ သႂ်ႇ Emp24 ယဝ်ႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း CHARMM GUI process ဢၼ်လဵဝ်ၵၼ်ၼၼ်ႉသေ ႁဵတ်းႁႂ်ႈ system ၼၼ်ႉ ဢေႇသုတ်းလႄႈ ႁႂ်ႈၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ်သေ ဝၢႆးၼၼ်ႉ ႁဵတ်းၵၢၼ် 8 s ၼႂ်းၵၢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
တွၼ်ႈတႃႇ လွၵ်းပိူင်တင်းမူတ်းၼၼ်ႉ ၽွင်းမိူဝ်ႈ ႁဵတ်းၵၢၼ် ၽဵင်ႇပဵင်းၵၼ်ၼၼ်ႉ ႁႅင်းတဵၵ်းၼၼ်ႉ လႆႈထုၵ်ႇ ၶိူင်ႈထၢတ်ႈ Berendsen (59) ၵုမ်းထိင်းဝႆႉသေ ၽွင်းမိူဝ်ႈ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇၼၼ်ႉ ႁႅင်းတဵၵ်းၼၼ်ႉ လႆႈဢဝ် ၶိူင်ႈထၢတ်ႈ Parrinello-Rahman (60) ၵုမ်းထိင်းဝႆႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းၵူႈလွင်ႈလွင်ႈၼၼ်ႉ ႁႅင်းတဵၵ်းၽတ်ႉၽဵင်ႇမၼ်း ပဵၼ် 1 bar သေ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆး ၵွင်ႉသၢၼ် ႁႅင်းတဵၵ်း ဢၼ်ပဵၼ် semi-isotropic ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼႂ်းၵၢၼ်ၽဵင်ႇပဵင်းလႄႈ ၵၢၼ်ႁဵတ်းဢွၵ်ႇၼၼ်ႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၶိူင်ႈတႅၵ်ႈတၢင်းမႆႈ (61) ဢၼ်မီး လွင်ႈၶိုၼ်းမႄးထတ်း တၢင်းဝႆးၼၼ်ႉသေ ၵွင်ႉသၢၼ် တၢင်းမႆႈ ပရူဝ်ႇတိၼ်း၊ ၼႂ်းၶၢဝ်းတၢင်း ဢၼ်ႁဵတ်းၵၢၼ်တင်းမူတ်းၼၼ်ႉ တၢင်းမႆႈဢၼ်ယိူင်းဢၢၼ်းဝႆႉၼၼ်ႉ ပဵၼ် 310K ၼႆယဝ်ႉ။ လွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ် ဢၼ်ဢမ်ႇမီးလွင်ႈၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်ၼၼ်ႉ လႆႈၼပ်ႉသွၼ်ႇလူၺ်ႈ ႁဵတ်းဢွၵ်ႇ သဵၼ်ႈမၢႆ ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ် ဢၼ်ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆး Verlet ဢၼ်မီး လွင်ႈၶၢမ်ႇလႆႈ 0.005 buffer ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၶေႃႈၵႂၢမ်း Coulomb ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း တူင်ႇဝူင်း လွင်ႈတုမ်ႉတွပ်ႇ လႄႈ တၢင်းၵႆ ဢၼ်တတ်းဢွၵ်ႇ 1.1 nm သေ ၼပ်ႉသွၼ်ႇဝႆႉယဝ်ႉ။ ၶေႃႈၵႂၢမ်း Vander Waals ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်း လွၵ်းလၢႆးတတ်း ဢၼ်မီး တၢင်းၵႆတတ်း 1.1 nm သေယဝ်ႉ လွၵ်းလၢႆးတတ်း Verlet ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်းတႃႇ လွင်ႈလႅၵ်ႈလၢႆႊ ဢၼ်ၸၢင်ႊပဵၼ်လႆႈ (62) ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
ၸႂ်ႉတိုဝ်း VMD သေ တၢင်းယၢဝ်းႁွၼ် ဢၼ်တတ်းဝႆႉ ၼႂ်းၵႄႈ မၢၵ်ႇၼပ်ႉ DOPC phosphate ဢမ်ႇၼၼ် မၢၵ်ႇၼပ်ႉ ceramide AM1 လႄႈ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်းၼၼ်ႉ ပဵၼ် 0.7 nm သေ ၼပ်ႉသွၼ်ႇ တၢင်းၼမ် ထၢတ်ႈယၢင် ဢၼ်ၵွင်ႉၵၢႆႇၵၼ်တင်း ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸွမ်းၼင်ႇပိူင်တၢႆပႃႈတႂ်ႈၼႆႉသေ ၼပ်ႉသွၼ်ႇတူၺ်း လွင်ႈလူတ်းယွမ်း-လွင်ႈၶိုၼ်ႈယႂ်ႇ (DE) မိူၼ်ၼင်ႇ (63) ၼၼ်ႉလႄႈ DE factor = (တၢင်းၼမ် ၼမ်ႉၼၵ်း ၼႂ်းထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း 0.7) ၼႂ်းထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း 0.7 (တၢင်းၼမ် Cer ၼႂ်းထၢတ်ႈၼမ်ႉၼၵ်း တင်းမူတ်း) ။
ၵႃႈၶၼ်ဢၼ်လႆႈတၢင်ႇလၢတ်ႈၼၼ်ႉ လႆႈမႃးပဵၼ် ၽတ်ႉၽဵင်ႇသေ ၶွပ်ႇဢၼ်ၽိတ်းပိူင်ႈၼၼ်ႉ ပဵၼ် ၽိုၼ်မိူၼ် SE ဢၼ်လွတ်ႈလႅဝ်း 4 ဢၼ်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ လွင်ႈလမ်ႇလွင်ႈ ၽၢႆႇသဵၼ်ႈမၢႆ ၶွင် DE ၼၼ်ႉ လႆႈၼပ်ႉသွၼ်ႇ လူၺ်ႈ t test [(ၽတ်ႉၽဵင်ႇDE-factor-1)/SE] ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼပ်ႉသွၼ်ႇ ၵႃႈၶၼ် P ဢၼ်လုၵ်ႉတီႈ လွင်ႈၽႄႈၸွတ်ႇ ဢၼ်မီးႁွႆးလဵဝ်ၼၼ်ႉ။
ၶိူင်ႈၸႂ်ႉတိုဝ်း GROMACS ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်းတႃႇၼပ်ႉသွၼ်ႇ ၽႅၼ်ႇလိၼ် 2D တၢင်းၼႅၼ်ႈၼႃၽၢႆႇလင် ၶွင်ပိူင်ဢၼ်ပႃး Emp24 ၼႂ်းၶၢဝ်းတၢင်း 250 ns ဢၼ်လိုၼ်းသုတ်း ၶွင်လွင်ႈၸွမ်းလင်ၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၼင်ႇႁိုဝ် တေလႆႈၽႅၼ်ႇလိၼ် လွင်ႈၶိုၼ်ႈယႂ်ႇ/လွင်ႈယွမ်းလူင်း ၶွင် သႄႇရႃႇမၢႆႉၼၼ်ႉ ၽႅၼ်ႇလိၼ် လွင်ႈၼႅၼ်ႈၼႃ ၶွင် Cer ၼၼ်ႉ ဢဝ် ၽႅၼ်ႇလိၼ် Cer လႄႈ DOPC ႁူမ်ႈၵၼ်သေ ၸႅၵ်ႇၽႄ တင်း လွင်ႈၶွၼ်ႈတုမ် ၶွင် Cer ၼႂ်းတူဝ်ၶိင်းၼၼ်ႉယဝ်ႉ။ ၸႂ်ႉတိုဝ်း ၽႅၼ်ႇလိၼ်သီ ဢၼ်မိူၼ်ၵၼ်။
တႃႇတေလႆႈၶေႃႈမုၼ်းၽိူမ်ႉထႅမ် တႃႇလိၵ်ႈပိုတ်ႇၼႆႉ တူၺ်းလႆႈတီႈ http://advances.sciencemag.org/cgi.
ၼႆႉပဵၼ် လိၵ်ႈပိုတ်ႇၽုၺ်ႇ ဢၼ်ပိုၼ်ၽႄ ၸွမ်းၼင်ႇ ၶေႃႈမၵ်းမၼ်ႈ ၶွင် Creative Commons Attribution-Non-Commercial License ဢၼ်ပၼ်ၶႂၢင်ႉ တႃႇၸႂ်ႉတိုဝ်း၊ ၽိုၼ်ဢိင်ႈ.
မၢႆတွင်း - ႁဝ်းၶႃႈ ယွၼ်းႁႂ်ႈၸဝ်ႈၵဝ်ႇ ပၼ် ဢီးမေးလ် ၸဝ်ႈၵဝ်ႇ ၼင်ႇႁိုဝ် ၵူၼ်းဢၼ်ၸဝ်ႈၵဝ်ႇ ပၼ်တၢင်းႁၼ်ထိုင် တီႈၼႃႈလိၵ်ႈၼၼ်ႉ တေႁူႉဝႃႈ ၸဝ်ႈၵဝ်ႇ ၶႂ်ႈႁႂ်ႈၶဝ် ႁၼ် ဢီးမေးလ်ၼၼ်ႉ လႄႈ ဢမ်ႇၸႂ်ႈ ဢီးမေးလ် ဢၼ်ဢမ်ႇလီၼၼ်ႉၵွႆး။ ႁဝ်းၶႃႈတေဢမ်ႇၵဵပ်းဢဝ် ဢီးမေးလ်သင်။
ၶေႃႈထၢမ်ဢၼ်ၼႆႉ ၸႂ်ႉတိုဝ်းတႃႇထတ်းတူၺ်းဝႃႈ ၸဝ်ႈၵဝ်ႇပဵၼ်ၽူႈမႃးဢႅဝ်ႇလႄႇႁိုဝ် လႄႈ ႁႄႉၵင်ႈလွင်ႈသူင်ႇလိၵ်ႈ spam လူၺ်ႈလၢႆးဢွမ်လူမ်း။
သူဝ်ႇၾီႇယႃႇ ရူဝ်ႇတရီႇၵျိတ်ႉ-ၵႃႇလႃႇတူဝ်ႇ၊ ဝႃႇၵႃႇ)၊
လွင်ႈထႆႇႁၢင်ႈ 3D ဢၼ်မီးလွင်ႈၶႅမ်ႉလႅပ်ႈသုင် ဢၼ်ပဵၼ်ၶၢဝ်းယၢမ်းတႄႉတႄႉၼၼ်ႉ ၼေဝႆႉ လွင်ႈလမ်ႇလွင်ႈ တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်း ceramide တႃႇၸႅၵ်ႇၽေ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း တီႈဢၼ်လိူၵ်ႈဢွၵ်ႇ တီႈဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
သူဝ်ႇၾီႇယႃႇ ရူဝ်ႇတရီႇၵျိတ်ႉ-ၵႃႇလႃႇတူဝ်ႇ၊ ဝႃႇၵႃႇ)၊
လွင်ႈထႆႇႁၢင်ႈ 3D ဢၼ်မီးလွင်ႈၶႅမ်ႉလႅပ်ႈသုင် ဢၼ်ပဵၼ်ၶၢဝ်းယၢမ်းတႄႉတႄႉၼၼ်ႉ ၼေဝႆႉ လွင်ႈလမ်ႇလွင်ႈ တၢင်းယၢဝ်းၶိူဝ်း ceramide တႃႇၸႅၵ်ႇၽေ ထၢတ်ႈပရူဝ်ႇတိၼ်း တီႈဢၼ်လိူၵ်ႈဢွၵ်ႇ တီႈဢၼ်ဢွၵ်ႇမႃးၼၼ်ႉယဝ်ႉ။
©2020 ၸုမ်းဢမေႇရိၵၢၼ်ႇ တႃႇၶိုၼ်ႈယႂ်ႇပၢႆးသၢႆႊ။ သုၼ်ႇလႆႈသုၼ်ႇပဵၼ်ၵူႈလွင်ႈလွင်ႈ။ AAAS ၼႆႉ ပဵၼ်ၽူႈႁူမ်ႈၼႃႈၵၢၼ် ၸုမ်း HINARI ၊AGORA ၊OARE ၊CHORUS ၊CLOCKSS ၊ လွင်ႈၶိုၼ်ႈယႂ်ႇပၢႆးသၢႆႊ ISSN 2375-2548။